尘螨变应原Derf1真核表达载体的构建及转染-现代生物医学进展.PDF

2612 · · 现代生物医学进展 Progress in Modern Biomedicine Vol.11 NO.14 JUL.2011 尘螨变应原Der f1 真核表达载体的构建及转染CHO 细胞* 1 2 1 1 1 1 彭江龙 崔玉宝 钱士匀 裴 华 陈年根 黄幼生 1 571101 2 224006 （海南医学院海南海口 ；盐城卫生职业技术学院 江苏盐城 ） 摘要目的：构建尘螨变应原Der f1 真核表达载体，转染真核细胞并进行蛋白表达。方法：根据Genebank 中Der f1 基因的核酸序 AB034946 PCR JM109 Der f1 pcDNA3. 列（ ），设计引物，采用 法，从保存的 工程菌中扩增 编码基因，克隆到真核表达质粒 1/myc-his A 上，以脂质体法转染CHO 细胞，经G418 筛选，进行稳定表达细胞株的筛选和鉴定。结果：将目的基因Der f1 成功连 接到pcDNA3.1/myc-hisA-Derf1 并转染CHO 细胞，获得稳定表达的CHO 细胞株。结论：成功构建了尘螨变应原Der f1 真核表达 , CHO 载体并转染 细胞表达蛋白质。 Der f1 CHO 关键词：尘螨； 基因；真核转染； 细胞 R384.4 R392.8 A 1673-6273 2011 14-2612-03 中图分类号： ， 文献标识码： 文章编号： （ ） Construction of Eukaryotic Vector of Derf1 Gene of Dermatophagoides Farinae and Transfection of CHO Cells* 1 2 1 1 1 1 1 PENG Jiang -long , CUI Yu -bao , QIAN Shi-yun , PEI Hua , CHEN Nian -gen , HUANG You -sheng , HUANG Mian -qing ( 1 Hainan Medical College, Haikou 57 110 1, China; 2 Yancheng Health Vocational Technical College, Yancheng 224006, China) ABSTRACT Obj ective: To construct eukaryotic expressing vector of derf1 gene of dermatophagoides farinae, and transfect CHO cells for protein expression. Methods: According to the Genebank nucleic acid sequences of Derf1 (No.AB034946), designed primers, amplified the Der f 1 gene from the preservative engineering bacteria JM109 by PCR, then cloned it into plasmid pcD