HIV一1Tat基因在pEGx·KG中的融合构建及原核表达.PDFVIP

维普资讯 海南医学院学报 2008，14(2) 116 JourndofHainanMedicalCollege HIV一1Tat基因在 pEGx—KG中的融合构建及原核表达 陈 凡 ，周 菁 ，章晓联 ，谭光宏 ，林映莹 (1．海南医学院热带病重点实验室 ，海南 海 口 571101；2．武汉大学分子免疫室，湖北 武汉 430072) [摘要]目的：在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达融合的Tat蛋白。方法：用PCR方法从HIVeDNA 文库中扩增出Tat基因，并将其插入到表达载体pEGx—KG中，转化到E．coli中进行融合表达，表达产 物用蛋 白电泳和 Western—blot进行鉴定。结果：成功地构建了重组质粒pEGx—KG—Tat，重组质粒在大肠 杆菌BI21(DE3)中得到高效表达。蛋白电泳和Western—blot分析表明，在相对分子质量(Mr)为38．9 kDa处有 1条特异性的带。结论：GST基因与HIV一1Tat基因的融合构建，使Tat蛋白在大肠杆菌中得 到高效表达，为艾滋病的防治研究奠定了基础。 [关键词]大肠杆菌；HIV一1Tat；pEGx—KG载体；基因表达 [中图分类号]Q786 [文献标识码]A [文章编号]1007—1237(2008)02-0116-03 ThefusionconstructionofHIV一1TatgeneinpEGx—KGandefficientexpressioninEsch— erichiacoli CHEN Fan ，ZHOU Jing2，ZHANG Xiao—lian ，TAN Guang—hong，LINYing—yin (1．KeyLaboratoryforTropicalDiseases，HainanMedcialCollege，Haikou571101，China；2．Departmentof MolecularImmunology，WuhanUniversity，Wuhan430072，China) [ABSTRACT]Objective：TostudytheefficientexpressionofGST—TatproteininEscherichiacoliBZ21 (DE3)．Methods：HIV一1TatgenewasamplifiedbyPCRfromeDNAlibraryofHIVandwasinsertedintovector ofpEGx—KG．TherecombinantplasmidwastransferredandexpressedinE．coliBI21(DE3)．Theexpressed productswereidentifiedbySDS—pageandWestern—blot．Results：HIV一1Tatgenewasamplifiedsuccessfullyby PCR．TherecombinantplasmidwasexpressedefficientlyinE．coli(BI21)．SDS—pagenadWestern—blotnaalyses showedhteexpressedTatfusionproteinwiht relativemolecularweightwas38．9kDa．Conclusion：HIV一1Tat genecanbeclonedandGST-TatfusionproteinCna beexpressedefficientlyinE．coli，whichmaycontributetofur- hterresearchofanti—AIDS． [KEYWORDS]Escherichiacoli；HIV一1Tat；pEGx—KGvector 转录反式激活因子蛋 白(trans—activatoroftrna— 的情况下，整合后的病毒 DNA转录效率很低。Tat scription，Tat)在HIV一1的转录过程中起着十分重要 蛋白可抑制T细胞免疫应答，功能性地上调T细胞 的调节作用。由HIVTat基因编码。Tat蛋白是 和巨噬细胞表达 FasL 并诱导其凋亡。此外，Tat HIV基因复制和表达的必需因子，通过结合 HI