文心兰花发育相关基因0AP3和OMADS10的表达分析.docVIP

文心兰花发育相关基因0AP3和 OMADS10的表达分析 徐小雁1,2，龙明华(1(，田敏2 （1.广西大学农学院，南宁 530003 ；2. 中国林科院亚热带林业研究所，富阳 311400） 摘要：为研究兰花MADS-box基因的表达与花器官发育之间的关系，以文心兰 (Oncidium Milliongolds)为材料，文心兰中AP1家族成员OMADS qRT-PCR表达分析表明：OMADS基因OMADS10在合蕊柱中强烈表达，其次是花瓣。 关键词：文心兰；花器官形成； OMADS6基因；OAP3基因；qRT-PCR Expression Analysis of Flowering-related gene OAP3 andOMADS6 in Oncidium XU Xiao-yan1,2 , LONG Ming-hua1( , TIAN Min2 （ 1.Agricultural college ,Guangxi University,Nanning 530003,China; 2.Research Institute of Sub Forestry, Chinese Academy Forestry, Fuyang 311400, Zhejiang, China） Abstract: To explore the the relationship between orchid MADS - box of gene expression and floral organ development,The expression of OMADS10 and OAP3 gene in Oncidium Milliongolds detected by qRT-PCR . qRT-PCR analysis showed thatOMADS10 andOAP3 mRNA was detected during all the development of flower buds, which also detected in all four floral organs as well as in vegetative leaves and shoots.But expression obviously different: OMADS10 strongly expressing in column , followed by petals. OAP3 strongly expressing in sepals, followed by column. Keywords: Oncidium Milliongolds；Floral initiation；OMADS10 gene；OAP3 gene；qRT-PCR APETALA3（AP3）PISTILLATA(PI), AGAMOUS（AG）等[2]。这些基因中，除了APETALA2(AP2)，都是MADS-box基因家族，因此MADS-box 基因在花发育过程中起关键作用[2-3]。（Oncidium Milliongolds）OMADS10和AP3同源基因OAP3在花芽不同发育时期和不同器官的表达特性，旨在为进一步研究兰花花器官发育的分子调控机制奠定基础，为 1 材料与方法 1.1实验材料 不同生长阶段和花器官样品 摘取不同直径的花芽，按直径大小分为小花芽（小于2mm），中花蕾（2-5mm），大花蕾（5-10mm）和张开的花朵（图1），每个样6-12个。分别剥取张开花朵的花萼、花瓣，、唇瓣、合蕊柱，液氮速冻存放于-80℃冰箱。 1.2 总RNA的提取及基因全长克隆 总RNA提取依照柱式植物RNAout2.0（北京天恩泽公司）的操作说明书进行。按照Reverse Transcription System(美国Promaga公司)反转录试剂盒说明书合成cDNA第一链。 1.3 实时荧光定量PCR检测基因的表达 分别根据文心兰OMADS10、OAP3、actin的mRNA序列（GenBank登录号分别为：HM140846，GU644447，HQ316804）设计了荧光定量内参引物对OMADS10F/OMADS10R，Q-OAPF/Q-OAPR和Q-ACTF/Q-ACTR如（表1），荧光定量所用引物送大连宝生物公司合成。按照试剂盒SYBR( Premix Ex TaqTM （ TaKaRa公司）操作说明，在ABI 公司的7300实时定量PCR 扩增仪上完成，以上实验重复3次。通过扩增曲线和熔解曲线, 确定引物的特异性。利用S