河南博士后项目启动经费总结报告模板-河南师范大学.DOC

河南省博士后项目启动经费资助 总结报告 姓　　名　　　 宇文延青　 　　　 编　　号　　　 2012059 　 　　　　 所 在 设 站 单 位　　 河南师范大学 　　　　 项目名称 日本三角涡虫(Dugesia japonica)成体 干细胞的分离纯化及在损伤修复中作用 资助金额　 3万元 填报日期　　 　　 　　 河南省博士后管理委员会办公室制 资助经费使用情况 开支项目名称 金 额 备 注 仪器设备使用费 5,000元 试验用材料费 17,500元 测试费 3,500元 差旅费 2,500元 科研管理费 1,500 合计：30,000元 余额：0元 本研究项目其它经费来源情况 经费来源 金 额 合计： 剩余资金以及用资助金购买的仪哭设备、图书资料等物品的处理情况 剩余资助金或物品名称 留给设站单位 带 走 □ □ □ □ □ □ □ □ 资助金在科研工作中起到的作用 弥补了课题研究过程中经费的不足，充足的资助金保障了研究工作的顺利进行。 研究工作总结 1．主要研究内容、研究方法及研究成果： 1.1 主要研究内容 日本三角涡虫（Dugesia japonica）具有极强的再生能力，是动物再生机制研究的优良的模式动物，而neoblast细胞是D, japonica体内唯一具有增殖能力的全能干细胞，是其再生的生物学基础。本项目的研究内容主要包括以下三个方面：（1）采用机械切割与胰蛋白酶消化相结合的方法，建立D. japonica的组织分散方法，并研究neobalst的分离纯化方法；（2）采用SMART RACE方法克隆neoblast细胞的标志基因，为neoblast标记奠定基础；（3）在分离neoblast的基础上，通过体外培养技术和移植技术研究neoblasts对D. japonica再生能力的影响。 1.2 研究方法 D. japonica组织分散主要采用机械切割与胰蛋白消化相结合的方法，采用正交设计对影响胰蛋白酶消化效果的主要因素——温度、时间和胰酶浓度进行筛选，以细胞分散较好、细胞结构完整和细胞损失较少为标准，筛选出最佳消化温度、时间及胰酶尝试，初步建立D, japonica组织分散方法。 （2）标志基因克隆方法 标志基因克隆主要采用同源克隆方法：首先在GenBank上搜索和下载全能干细胞的标志基因，在用生物学软件对序列进行同源性分析的基础上，设计简并引物克隆该基因的保守区，然后用SMART RACE方法扩增其全长。 （3）Neoblast功能研究 主要采用体外培养和移植技术进行研究。通过辐射技术清除D. japonica体内的neoblasts，再将体外分离培养的neoblasts植入处理的D. japonica体内，研究neoblasts对D. japonica再生能力的影响。 1.3 研究成果 （1）初步建立的D. japonica的组织分散方法，具体方法如下：以0.25%胰酶（pH = 7.4）按5:1（体积比）加入待消化组织，在20℃水浴条件下消化15 min，然后以4℃、1000 rpm离心3 min收集分散细胞； （2）成功克隆neoblast细胞标志基因pumilio，并进行了深入的生物学分析。 （3）发表相关研究论文（SCI）2篇。 *Yuwen Y.Q, Dong Z.M., Si X.H. Chen G.W*. 2014. A pumilio homolog in Polycelis sp. Development Genes Evolution, 224 (1): 53-56. *Dong Z.M., Yuwen Y.Q., Wang Q.H., Chen G.W*. Liu D.Z. 2012. Eight genes expression patterns during visual system regeneration in Dugesia japonica. Gene Expression Patterns. 12 (1-2): 1-6. 2．研究成果的科学意义、应用前景、推广开发价值、以及经济和社会效益： 3．资助项目完成论著情况(包括论著名称、发表时间、登载论文的刊物名称及卷期或出版专著的出版社全称)：[1] Yuwen Y.Q, Dong Z.M., Si X.H. Chen G.W*. 2014. A pumilio homolog in Polycelis sp. Development Genes Evolution, 224 (1): 53