经口急性毒性实验课件.ppt

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * *  实验原理 在24小时内一次或多次给予受试化学物，观察和了解实验动物产生的急性毒性及其强度、中毒死亡特征以及可能原因。 根据受试物引起实验动物死亡与染毒剂量之间的剂量-反应关系，计算半数致死量( LD50)。 实验目的 ◆ 掌握化学物毒性评价试验方法 ◆ 掌握经口灌胃技术 ◆ 学习中毒症状观察方法。 实验内容 试验动物的选择和性别鉴定。 试验动物的称重、编号以及随机分组方法。 急性毒性试验常用染毒途径和方法。 急性毒性反应的观察和LD50计算。 材料和试剂 实验动物：健康小鼠 器 材：小鼠灌胃针、电子天平 动物体重计、外科剪刀和镊子 试 剂：受试物 实验动物编号的标记方法 颜料涂擦被毛编号法（常用于大小鼠）： 红色：0.5%中性红或品红溶液 黄色：3-5%苦味酸溶液（水） 80-90%苦味酸酒精饱和溶液 咖啡色：2%硝酸银 黑色：煤焦油的酒精溶液 实验动物编号的标记方法 单 色 法 大小鼠标记方法（单色法n10） 实验动物编号的标记方法 大小鼠标记方法（单色法n10） 单色法标记原则：单色法编大于10的号码时，我们规定顺时针旋转，后一位必需大于前一位数，例如：可以编，12，13，14……19，但不能编10，11，20，21，22，30，31，32，33，等，以此类推。100以内最大能编89号。 实验动物编号的标记方法 大小鼠标记方法（双色法n10） 双 色 法 实验动物编号的标记方法 大小鼠标记方法（双色法n10） 红色表示十位数： 头部染红色为10 左前肢为20 左腰部为30 黄色表示个位数。 实验动物编号的标记方法 烙印编号法； 体内埋号编号法； 耳孔编号法； 挂牌编号法； 其它标记方法 实验步骤 秤体重 编号 分组 （随机数字表法） 灌胃操作 中毒症状观察和死亡纪录 实验动物 预实验 组数和剂量 确定大致的 LD0和LD100 计算LD50 确定组距的方法 d = lgLD100 – lgLD0 n-1 式中：d---为组距 n---为设计时确定的剂量组数 急性毒性实验记录 受试物 名称： 提供单位： 染毒剂量： mg/kg 染毒途径： 动物种属品系： 动物来源： 合格证号： 室温： 相对湿度： 组别 染毒剂量 (mg/kg) 动物编号 性别 体重 (g) 染毒时间 症状 及出现时间 死亡时间 体重记录(g) …… LD50的计算—寇氏法 Karber法或平均致死量法，是依据剂量对数与死亡率呈S型曲线所包括的面积推导出死亡率为50%的剂量； 此法简单，准确率高，但实验设计要求每个染毒组实验动物数相同，各计量组距呈等比级数，死亡率呈常态分布，最低剂量组死亡率20%，最高剂量组80%。 LD50的计算—寇氏法 计算公式: lgLD50=1/2Σ(Xi + Xi+1)(Pi+1 - Pi) 式中: (Xi + Xi+1) ---- 为相邻两个试验组剂量之和 (Pi+1 - Pi) ---- 为相邻两组死亡率之差。 各组剂量为等比级数时简化为 lgLD50=Xm - d/2Σ(pi+1 + pi) 式中Xm为最高剂量对数；d为相邻两组剂量对数之和。 LD50标准差和95%可信限计算方法 式中: Pi ---- 死亡率， n ---- 每组动物数 LD5095%可信区间=Lg-1(lgLD50±1.96S lgLD50 SlgLD50=d Σ Pi(1 - Pi) n - 1 急性毒性评价 根据实验动物的中毒症状、出现死亡的时间和LD50，参照化学物质毒性分级标准，评价受试物的急性毒性大小及毒性特征。 注意事项 灌胃染毒时要求动物保持空腹状态，因此染毒前应禁食（不禁水）6～10小时。灌胃后至少2～3小时后才能喂食。油剂比水溶液要求限制喂食的时间更长些。 相同剂量的受试物，若以不同浓度给药，死亡情况会有所不同。常用的方法是将受试物体积固定，根据实验设计的剂量将受试物配制成不同浓度的溶液进行灌胃。 通常灌胃体积以体重的1%～2