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异柠檬酸脱氢酶的结构与功能研究
及MRGl5与PAMl4程互作用方式的研究
摘要
异柠檬酸脱氢酶(IDH)是一大娄酶家族，该酶催化异拧檬酸氧化脱羧生成
甜酮戊二酸，在生物的能建产生和生物合成代谢中越着非常重要的作用。真棱生
但其动力学机制和活性调节机理目前还不清楚。我们以结构生物学为研究手段，
力学税裁稻酒性调节祝疆。已得虱该酶不两形式(瓣生型蠢突变体)及萁穗关笺
台物的蛋白质晶体，通过分析已有的绐构，进行了氨基酸点突变。ser94对应于
EclDHd2发生可逆磷酸化调节酶活性的位点Serll3隔Asp279可以在没有底物豹
条件下与Ser辨形成氢键。对这两个位点我们设计完成了圈个突变体，分剐为
对NADP的艇；毽几乎没裔变化，其表现出的酶活性大大降低。同时，我{『3剥影a商
表现出对NADP的墨。值的变化，增大为野生型的25倍到90倍不等，而对异柠檬酸
化反应中都发挥着重要的作用，僵超作用的方式又不尽相同，分剐参与底物和辅
酶的结合。通过分析结构和酶学数据，我们提HclDH采用稳态随机的酶促反应
动力学极剁。我爨豹研究绥粟为阉磺嚣拧檬酸聪氢酶瓣缓讫祝制撼供了猿据，并
帮助我们分析理解该酶的生物学功能。
MRGl
5是组织中广泛表达的转深因子，在很多真核生物中都存在其同源
物，它们共同组成了MRG蛋白家族。MRGl5在照胎发育、细胞增殖和细胞衰
老过程中起鬟要馋矮。其羧基爨独立形戏一个瀑守豹MRG结稳域，参与转录澜
．1V-
寻找与PAMl4结合中超作用的重要氨澄酸位点。根据二级结构预测，我们将
戆稳互传矮鬣强。夔嚣我销逡葶亍Y
方式提供了一魑线索。
纛，酵母双杂交，定点突变
一V，
StructureandFunctionofIsocitrate and
dehydrogenaseStudy
ontheInteractionbetweenMRGl5andPAMl4
Style
and
Cell
JingyueZhao(BiochemistryBiology)
Directed
byProf．JianpingDing
Abstract
Isocitrate a of that the
dehydrogenases(IDHs)arefamilyenzymescatalyze
oxidative ofisocitrateto a
decarboxylationn—ketoglutarate．whichplayveryimportant
rolein and anabolism．Eukaryotic
energyproductionbiological
beenshowntohaveseveral functions；
IDHs(NADP-IDHs)have importantbiological
kinetic mechanismremains meansof
and
however，their regulatory unclear．By
structural com
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