应用生物测定法的分析研究重组水蛭素在家兔体内的药物代谢动力学.pdfVIP

应用生物测定法研究重组水蛭素在家兔体内的 药物代谢动力学 硕士研究生：任洪灿 指导老师：韩国柱 教授 专业名称：药理学 摘 要 目的：建立一种生物测定方法以检测家兔血浆中重组水蛭素 ivrH后的药物代谢动力学。为rH的新药开发及临床合理用药提供实 验依据。 方法： 1家兔血浆rH浓度的测定 借助rH的抗凝血酶活性测定血浆中rH浓度，选择凝血酶时间 (thrombin time，TT)为其活性指标，通过随行标准曲线计算rH血浆浓 度。 2影响TT测定的有关因素 固定其他条件不变，配置不同浓度的凝盘酶溶液，测定TT，比较 在不同酶浓度下，TT的改变。固定其他条件不变，改变Tris—HCL缓 冲液的pH，测定TT，探讨缓冲液pH对TT的影响，以便选择最佳pH 的缓冲液。 3方法学的验证 精密度、方法回收率、最低定量限和线性范围，按常规方法进行 测定。稀释回收率：配制一系列已知高浓度rH标准血浆样品(浓度记 为Co)，用空白兔血浆经过不同倍数的稀释(倍数记为N)，使稀释压 浓度在线性范围以内，再用上述测定方法测定得稀释浓度，记为Cd。 ·1‘ 的血浆rH标准溶液，即刻测其浓度，其余于一204C保存，分别于第2、 第4和第7天测定其浓度，以考察其稳定性。 4药代动力学研究 经耳缘静脉取血0．45ml，抗凝、离心得血浆，于一20。C保存待测。皮下 rH 给药组sc 300min经耳缘静脉分别取血，同上离心得血浆，冷冻待测。急性重度 rH 肾衰组造模后，iv 2．0mg／kg，同上离心得血浆。将所有血浆按上述 方法测定rH血浆浓度。结果经3p87程序处理拟合房室模型，并计算 出药代动力学参数。 结果： 1 TT测定的影响因素 随凝血酶浓度的增加，TT降低并显示双相改变：低浓度阶段 (1．25～5．0u／m1)，TT随凝血酶浓度增加急剧下降；高浓度阶段 (10．0-40，0 u／m1)，TT随凝血酶浓度增加缓慢下降，并趋近于一个恒定 值(3，6sec)。当凝血酶浓度为5u／ml时，其rH浓度的线性范围及相关 系数均优于凝血酶浓度为2．5u／ml，故选用凝血酶浓度为5u／ml。当缓 冲液pH从7．0升至7．4时，TT明显延长，当pH从7．0升至7．4时， TT变化不大。 2方法学的验证 对数TT延长百分率与浓度呈线性相关，r=0．98～0．99，线性范围为 间精密度9．2％-11．5％。方法回收率97．5～99．2％；在2-100倍的稀释范 围内，稀释回收率为93．6～94．8％。血浆样品在．20℃冰冻保存，在1周 内稳定。 3药代动力学特征 rH iv的血药浓度时程符合二室模型、线性动力学过程。高、中、 低剂量组主要药动学参数分别是：t1_．2。8．3～10．8min；tm8 0．09—49．12 58．4～59．0min，说明消除颇快；vdL／kg，说明分布不广；AUC 1050±109．0(高剂量)、553．6±203．8(中剂量)、297．8±55．9 gg／ml×rain 等参数随剂量改变无显著性差异(Po。05)。rH皮下给药其血药浓度时 程可用血管外一室模型加以描述，主要药动学参数为：V／f(c)0．27± O．06 ±7．10min； 522．32±81．00 C。。3．43±0．70；AUC Pg／ml×min，绝对 生物利用度为：940／0。急性重度肾衰家兔ivrH后的血药浓度时程符合 156．7min，为正常家兔1l倍以上；AUC 正常家兔13倍左右。 结论： I本文建立的生物测定法特异性高，精密度好，回收率高，适用 于家兔注射后rH血药浓度的测定和