大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定(实验报告).docVIP

大黄中蒽醌类成分的提取、分离和鉴定 实验目的 （1）熟悉蒽醌类成分的提取分离方法 （2）掌握H梯度提取法的原理和操作技术 （3）学习蒽醌类化合物鉴定方法 实验器材 材料及试剂：大黄粗粉、浓硫酸、NaHCO3、Na2CO3、NaOH、浓盐酸、乙酸乙酯、石油醚、乙醚、普通滤纸、薄层板、广泛PH试纸、剪刀、铅笔、尺子。 仪器：500mL圆底烧瓶、球形冷凝管（30cm）、橡皮管、烧杯、滴管、层析缸、250mL分液漏斗、布氏漏斗、抽滤瓶、水浴锅、集热式磁力搅拌器、磁子、循环水式多用真空泵、铁架台等。 实验原理 大黄为蓼科植物,味苦,性寒,具有泻热通肠、凉血解毒、逐瘀通经等功效。其主要成分为为蒽醌化合物，含量约为3%~5%，大部分与葡萄糖结合苷，游离苷元有大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚等。其中，大黄酸具有羧基，酸性最强；大黄素具有β-酚羟基，酸性第二；芦荟大黄素连有羟甲基，酸性第三；大黄素甲醚和和大黄酚的酸性最弱。根据以上化合物的酸度差异，可用碱性强弱不同的溶液进行梯度萃取分离。 大黄酸 R1=H R2=COOH 大黄素 R1=CH3 R2=OH 芦荟大黄素 R1=CH2OH R2=H 大黄素甲醚 R1=CH3 R2=OCH3 大黄酚 R1=CH3 R2=H 实验内容 大黄素的提取、分离流程图 大黄粗粉0g 20%H2SO4 150 ml 加热1h, 抽滤、干燥 滤饼 ml乙醚回流提取h 乙醚层 5%NaHCO3萃取 水层（紫红色） 乙醚层 HCl 5%Na2CO3 大黄酸沉淀（粗品） 水层（红色） 乙醚层 HCl 0.25% NaOH 大黄素沉淀（粗品）水层（红色） 芦荟大黄素、大黄酚、大黄素甲醚沉淀（混合物） 具体操作步骤 1. 游离蒽醌的提取 （1）称取大黄粗粉0g，加20%H2SO4水溶液0mL，在水浴上加热1小时，放冷，抽滤，滤饼NaOH溶液洗至近中性，于70℃干燥后，研碎，置0mL圆底烧瓶中，加入乙醚0mL回流提取1小时，得到乙醚提取液。（）乙醚提取液经薄层层析检查有大黄酸、芦荟大黄素、大黄素、大黄素甲醚和大黄酚。薄层板为硅胶—CMC粘合板，展开剂为石油醚（60～90℃）：乙酸乙酯（7：3）近水平或直立展开，在可见光下，可看到四个斑点。其中黄色斑点为大黄酚和大黄素甲醚的混合物,在此条件下,不能分开,其余3个斑点依Rf值（由大到小）的顺序是大黄素（橙色斑点）、芦荟大黄素（黄色斑点）、大黄酸（黄色斑点）Rf值。 2. PH梯度萃取分离 （1）将乙醚提取液加入250mL分液漏斗中，以35 mL 5 % NaHCO3水溶液萃取三次，乙醚层经薄层层析检查（展开剂同上），指示已提尽大黄酸后，合并三次NaHCO3萃取液，用浓盐酸酸化至PH 2-3左右，析出大黄酸沉淀。（注意：加酸时应缓慢加入，以防酸液溢出，如出现分层现象，需将上层乙醚蒸去才能析出固体）。滤。 （2）经5% NaHCO3水溶液萃取后的乙醚层，继以35 mL 5 % Na2CO3水溶液萃取三次，乙醚层经薄层检查（展开剂同上），指示已提尽大黄素后，合并三次Na2CO3萃取液，用浓盐酸酸化至PH2-3左右，析出大黄素沉淀。（酸化时注意操作同前）。滤。 （3）经5% Na2CO3水溶液萃取过后乙醚层以35 mL 0.25%?NaOH水溶液萃取四次，乙醚层经薄层检查（展开剂同上），指示已提尽后，合并三次?NaOH萃取液，用浓盐酸酸化至PH2-3左右，析出芦荟大黄素、大黄酚和大黄素甲醚沉淀混合物。（酸化时注意操作同前）。滤。 . 样品鉴定 (1) 碱液试验 分别取各蒽醌结晶数毫克置于样品管中，加2