实验报告-不同因素对酶的影响.docx

实验报告生物化学实验（甲）酶的基本性质实验——底物专一性剂、激活剂和抑制、最适温度课程名称：指导老师：成绩：实验名称：实验类型：分离鉴定实验同组学生姓名：一、实验目的和要求（必填）二、实验内容和原理（必填）三、主要仪器设备（必填）四、操作方法和实验步骤五、实验数据记录和处理六、实验结果与分析（必填）七、讨论、心得Ⅰ.酶的基本性质——底物专一性一、实验目的和要求1. 了解酶的专一性。2. 掌握验证酶的专一性的基本原理及方法。3. 学会排除干扰因素，设计酶学实验。二、实验基本原理酶是一种具有催化功能的蛋白质。酶蛋白结构决定了酶的功能——酶的高效性，酶催化的反应（酶促反应）要比相应的没有催化剂的反应快103-1017 倍。酶催化作用的一个重要特点是具有高度的底物专一性，即一种酶只能对某一种底物或一类底物起催化作用，对其他底物无催化反应。根据各种酶对底物的选择程度不同，它们的专一性可以分为下列几种：1.相对专一性一种酶能够催化一类具有相同化学键或基团的物质进行某种类型的反应。2.绝对专一性：有些酶对底物的要求非常严格只作用于一种底物，而不作用于任何其他物质。如脲酶只能催化尿素进行水解而生成二氧化碳和氨。如麦芽糖酶只作用于麦芽糖而不作用其它双糖，淀粉酶只作用于淀粉，而不作用于纤维素。3.立体异构专一性有些酶只有作用于底物的立体异构物中的一种，而对另一种则全无作用。如酵母中的糖酶类只作用于D-型糖而不能作用于L-型的糖。本实验以唾液淀粉酶、蔗糖酶对淀粉、蔗糖水解反应的催化作用来观察酶的专一性。采用Benedict试剂检测反应产物。Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。 Na2CO3+ 2H2O 2NaOH + H2CO3 CuSO4+ 2NaOH Cu(OH)2+ Na2SO4还原糖(—CHO or —C=O)+ 2Cu(OH)2 Cu2O (砖红色或黄色) + 2H2O + 糖的氧化产物在分子结构上，淀粉几乎没有，而蔗糖、棉子糖全无半缩醛基，它们均无还原性，因此它们与Benedict试剂无呈色反应。淀粉被淀粉酶水解，产物为葡萄糖；蔗糖和棉子糖被蔗糖酶水解，其产物为果糖和葡萄糖，它们都为具有自由半缩醛羟基的还原糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。本实验以此颜色反应观察淀粉酶、蔗糖酶对淀粉和蔗糖的水解作用。三、实验材料与试剂1、实验材料⑴蔗糖酶(样品Ⅳ）；⑵新鲜唾液（含唾液淀粉酶）；2、实验试剂⑴蔗糖酶液蔗糖酶液(样品Ⅳ）加蒸馏水适当稀释，备用；⑵唾液淀粉酶液（学生自制）取0.5mL唾液至25ml量筒中，用蒸馏水（稀释）到25ml，用棉花过滤备用。唾液稀倍数因人而异，可稀释50～400倍，甚至更高；⑶ 5%蔗糖（A.R.）溶液；⑷ 0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）；⑸ Benedict试剂；四、实验器材与仪器1.漏斗， 2.脱脂棉花； 3.恒温水浴（37℃，100℃）； 4.量筒；5.试管；6.烧杯；7.吸量管。五、实验操作方法和步骤㈠检查试剂取3支试管，按下表操作：注：1、检查目的：试剂是否有干扰因素存在。2、也可对蔗糖酶液、唾液淀粉酶液进行检查是否也有干扰因素存在，请自己设计。㈡淀粉酶的专一性取三支试管，按下表操作：注：可增加一组唾液淀粉酶液经100℃加热3min处理后的样品对照组。㈢蔗糖酶的专一性取三支试管，按下表操作：注：可增加一组蔗糖酶液 经100℃加热3min处理后的样品对照组。六、结果分析讨论各试管观察结果依次是：（一）：1号蓝绿色，2号蓝色， 3号蓝色Benedict试剂是碱性硫酸铜溶液，具有一定的氧化能力，能与还原性糖的半缩醛羟基发生氧化还原反应，生成砖红色氧化亚铜沉淀。3只试管都为蓝色说明几只试管中都没有果糖和葡萄糖，说明在不加酶时，淀粉和蔗糖不易水解。试剂无干扰因素的存在。（1号试管是蓝绿色可能是因为有少部分的淀粉水解）（二）：1号土黄色，2号黄绿色，3号蓝色加入唾液淀粉酶，1号试管底物是淀粉，所以很容易水解成葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以1号颜色变化比较大。（2号可能是因为蔗糖在37℃恒温水浴中也有少部分水解，所以颜色变化，但变化不明显。）总的来看可以看出唾液淀粉酶只对淀粉有催化活性，不能催化蔗糖水解，具有对淀粉的底物专一性。3号是对照。（三）：1号蓝色， 2号红棕色，3号蓝色加入蔗糖酶，2号试管底物是蔗糖，所以很容易水解成果糖和葡萄糖，与Benedict试剂共热，即产生红棕色Cu2O沉淀。所以2号颜色变化比较大。（1号可能是因为淀粉在37℃恒温水浴中也有部分水解，所以