动物疫苗生产中异源微生物污染清除技术的建立及应用.pdfVIP

.80. Animal Husbandry VeterinarγMedicine 2014 Vol. 46 No.9 动物疫苗生产中异源微生物污染清除技术的建立及应用 黄海军l 气高其双1 ，吴建英2 ，程苦1 ，张四化2 ，陈志华l ，占才耀1 ，王莲芳1 ，刘武1 ，刘杰1 (1.武汉市畜牧兽医科学研究所，湖北武汉 430208; 2. 武汉市畜牧兽医局，湖北武汉 43∞23 ) 摘要:通过2 种方式建立了清除细胞、病毒等培养用原材料中异源微生物污染物的技术: 1) 采用钻-60) 射线辐照技术彻底除去细胞培养基、 洗涤液、消化液等与细胞直接接触的原材料中的异源微生物，确定了钻-60 最佳辐照剂量 (12 kGy); 2) 通过对细胞进行基因遗传修饰建立抗病 专用细胞系(株)。试验证实， 2 种方式在获取无异源微生物方面均有较好效果并各有优点。第一种物理方式处理时间短、效果好;第二种方式 处理时间较长，一旦建立起来稳定的种子细胞库可以长时间发挥作用，而且由于采用单个细胞克隆方法建立细胞库后细胞均一性明显提高，可以 有效提高生产产量。 2 种方式可供生物制品生产企业在生产过程不同阶段进行选择。 关键词:钻 60) 射线;细胞培养;病毒培养;支原体:基因修饰 中图分类号: S852.4 文献标志码:B 文章编号: 0529-5130(2014)09-0080-04 牛血清是细胞、病毒培养中最重要的培养基成分 (BVDV) ，而用常规过滤方法难以清除，影响细胞和 之→[1J 。但在棋牛血清中常含有某些微生物，包括 病毒培养。因此，研究制备无病原体血清的简易方 支原体和病毒，其中大部分血清中存在牛腹泻病毒 法，满足细胞、病毒培养的需要，特别是保存种子传 代细胞和病毒不被污染具有重要意义。此外，在细 收稿日期: 2013-09-26 胞、病毒培养过程中经常使用的 PBS 和膜蛋白酶等 基金项目:国家自然科学基金项目(3120193圳、武汉市晨光计 物质，也可能因携带病原体而带入培养物，导致细 划项目( 201150431078 )、武汉市农科院青年英才计划项目 胞、病毒培养的失败。美国 Hyclone 试验有限公司用 (YC201101 )和攻关项目 (Y1201208 )资助 钻-60γ 射线照射处理组织培养的动物血清灭活其中 作者简介:黄海军 (1980斗，男，高级畜牧师，博士，研究方向 为动物生物技术与疫病防控研究， E-mail: hygene@ 存在的病毒，但具体方法未见报道。钻-60{ 射线可 [归川5盯J Yas描su叫呻d也a A , 肌Klmu盯ura-Ku山时叫roda叫J ， Og伊H由m凹mot切oM， e