双抗体夹心ABC-ELISA检测弓形虫循环抗原方法的建立.pdfVIP

.65. 畜牧与兽医 2017 年第49 卷第1 期 宫枫举，蒋蔚，陈永军，等.双抗体夹心 ABC-ELISA 检测弓形虫循环抗原方法的建立 [JJ. 畜牧与兽医， 2017 ， 49 (1): 65-70. Gong F J , Jiang W, Chen Y J , et al. Establishment of a double antibody sandwich ABC-ELISA method for detection of Toxoplasma gondii circulating antigen [1]. Animal Husbandrγ Veterinary Medicine , 2017 , 49 (1): 65-70. 双抗体夹心 ABC-ELISA 检测弓形虫循环抗原方法的建立 官枫举1 ， 2 ，蒋蔚2 ，陈永军2 ，薛俊欣1 ， 2 ，王民燕2 ，孙卫东l\ 王权2 * (1.南京农业大学动物医学院，江苏南京 21∞95; 2. 中国农业科学院上海兽医研究所，上海 2∞241) 摘要:为检测弓形虫循环抗原，以实现弓形虫急性感染的早期诊断，本研究建立了基于 ABC (avidin biotin -peroxidase complex) 放大系统的双抗 体夹心 ELISA 方法。通过制备弓形虫排泄分泌抗原(ESA) 并免疫功物，经3 种抗原的筛选以获得抗循环抗原(CAg) 的单抗，以方阵滴定法确 定最佳多抗包被浓度和单抗工作浓度，利用夹心法和 ABC 放大系统建立检测弓形虫循环抗原的夹心 ABC-ELISA 方法，用该方法对人工感染犬血 清和其他阳性血清样本进行检测以确定该方法的检出时间和准确性，并应用于临床样品的检测。结果:获得了 3 株针对不同抗原表位的单克隆抗 体，并对 CAg 有较高特异性。双抗体夹心 ABC-ELISA 反应条件:兔多抗包被浓度为 3. 7μιImL， 生物素标记 3A5 、 3E5 和lOF5-3 单抗在混合t 作液中的浓度分别为0.1 、 0.13 和 O. 12μglmL。该 ELISA 方法对 ESA 最低检测限为 1 1. 9 nglmL ，并与隐抱子虫早期感染牛血清、血吸虫尾蝴早 期感染牛血清、艾美耳球虫早期感染鸡血清、犬瘟热急性感染早期血清、犬细小病毒急性感染血清无交叉反应。用该ELISA 方法检测人工感染的 犬，于感染后2d 血清即显示阳性，该方法能明显区分标准阳性血清和阴性血清。用该方法检测68 份猪临床血样(其中包括2 份标准阳性血清) , 检测结果与 Nest-PCR 结果一致。表明该双抗体夹心 ABC-ELISA 方法特异性强、敏感性高，可用于弓形虫急性感染的早期或活动期的诊断。 关键询:弓形虫;急性感染;循环抗原;双抗体夹心ABC-ELISA 中固分类号: S855.9+9 文献标志码:A 文章编号: 0529-5130(2017)01-∞65-06 Establishment of a double antibody sandwich ABC-ELISA method for detection of Toxoplasma gondii circulating antigen 1 2 2 1 GONG Fengju ,2 , JIANG Wei , CHEN Yongjun , XUE Junxin ,2 ,