基于HSP60基因哈氏弧菌PCR检测方法的建立.pdfVIP

~ ~ -1且止 • 2013 年26 卷2 期 808 Southwest China Journal of Agricultural Sciences Vol. 26 No.2 文章编号:1∞1 -4829(2013 )02 -0808 -03 基于 HSP60 基因晗氏弧菌 PCR 检测方法的建立 何苹萍1 ，赵永贞1 ，陈秀荔1 ，张彬1 ，黄婷1 ，彭敏1 ，杨春玲1 ， 杨彦豪1 ，李咏梅1 ，邵朋威12 ，陈晓汉1 * (1.广西壮族自治区水产研究所，广西南宁 53∞21 ;2. 广西大学动物科学技术学院，广西南宁 53仪阴) 摘 要:研究基于哈氏弧菌HSP60 基因序列设计1 对特异性引物，通过优化PCR 条件，特异性及敏感性检测，建立了一套哈氏弧菌 特异性 PCR 检测方法。结果表明，该 PCR 检测方法可使分离自患病南美自对虾的哈氏弧菌扩增出 238 bp 的 HSP60 基因片段，其 他五种对照病原弧菌未扩增出任何条带;检测方法最低能检测出 2.1 pg 的哈氏弧菌基因组 DNA。表明建立的哈氏弧茵 PCR 检测 方法可用于该菌引起的水产动物疾病的快速诊断。 关键词:南美白对虾;哈氏孤菌;H5F吧。基因 ;PCR 检测 中图分类号:5945.4 + 1 文献标识码:A Development of Diagnostic PCR Assay for HSP60 of Vibrio harveyi HE Ping-ping 1 , ZHAO Yong-zhen 1 ,CHEN Xiu-li 1 ,ZHANG Binl , HUANG Ting1 , 1 1 1 1 1 1 PENG Min ,YANG Chun-ling ,YANG Yan-hao , U Yong-mei ,5HAO Peng_wei ,2 ,CHEN Xiao-han ( 1. Guangxi Fisheries Research Institute ,Guang对 Nanning53∞，21 ,China; 2. College of Animal Science and Technol唱y ， Guan伊i Universi- ty , Guangxi Nanning 530∞5 ， China) Abs位act: In this study , a specific method for detecting 陆，rio han均iw田 established by d田i伊ing one pair of 叩回迫c primers based on the HS P60 gene 由伊ences ， optimizing 由e PCR reaction condition , and testing the specificity and 盹nsitivity. 币le results showed that 由e PCR primers could amplify 238 bp HSPωgene， fragment from the DNA of 以 han叨，皿d no 阳itive reaction w皿 detected in 5 0也er pathogenic Vibrio sp白白 teste. 叽le 肥nsitivity t，四t indicated that the DNA of V. haroeyi could be detected at 0.21 pg. 币lerefore ，也e PCR protocol es- tablished in this study could be used to rapid di句1Il田e of the di配国e cau酷d b