生物化学和分子生物学课程试验教学大纲.DOC

《生物化学》和《分子生物学》课程实验教学大纲 课 程 名 称：生物化学与分子生物学实验技术 英 文 名 称：Experiment Technology of Biochemistry and Molecular Biology 课 程 编 号： 实 验 课 性 质：必修 课 程 负 责 人：崔 行 开放实验项目数：3 一、学时、学分 课程总学时：70 课程总学分：2.0 二、适用专业及年级 本大纲适用于医疗、公共卫生、口腔、护理、预防医学七年制学生。 三、实验教学目的与基本要求 掌握人体生命的物质基础，生物大分子的结构和功能。掌握各种生物物质能量的正常代谢过程，代谢调节，代谢障碍和临床疾病的关系。通过实验掌握基本的生物化学实验技术及验证部分课堂理论知识。 在实验教学中，要求学生掌握电泳技术、层析技术、分光光度法、离心技术、蛋白质及分子生物学等技术。掌握蛋白质、核酸、酶类的提取、测定，学习血液成分生化测定，以及部分生物化学理论知识的验证。掌握紫外—可见分光光度计、高速离心机、PCR仪、层析系统、电泳仪系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、电动匀浆器等仪器的使用，了解其性能、适用范围及注意事项。 四、主要仪器设备 紫外—可见分光光度计、高速离心机、PCR仪、层析系统、电热恒温水浴箱、凝胶扫描仪、电泳仪、电动匀浆器等。 五、实验课程内容和学时分配 序 号 实验项目 名 称 实 验 内 容 学时分配 实验属性 实验 类型 每组人数 实验要求 指导教师 已开/未开 1 1．可见分光光度技术 2．蛋白质含量测定 1．掌握朗伯-比尔定律。。。1.熟悉层析技术的原理、分类及应用范围。。SephadexG25脱盐法和用离子交换剂进行蛋白质的纯化。3.学习盐析的方法，用醋酸纤维素薄膜电泳法进行蛋白质的鉴定。 7 设计 基础 2 必做 已开 4 离心技术， 核酸的分离纯化及含量测定 1．熟悉离心技术的基本原理。。RNA、DNA的提取和含量测定方法。 7 综合 基础 2 必做 已开 5 酶的提取及比活性测定 1．掌握酶提取纯化的方法和技术以及应注意的问题。。。。Lineweaver-Burk法作图，计算其Km值。 2 验证 基础 2 必做 已开 7 pH对酶促反应速度的影响 本实验以磷酸苯二钠为底物，在不同pH值的甘氨酸缓冲液条件下，测定碱性磷酸酶的活性，从而确定其最适pH值。 2 验证 基础 2 必做 已开 8 温度对酶促反应速度的影响 本实验以碱性磷酸酶为例，在不同温度下保温一定时间，观察酶活性的差别。 2 验证 基础 2 必做 已开 9 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血LDH同工酶 掌握电泳分离同工酶的方法并了解其原理，了解显色原理，了解血清乳酸脱氢酶同工酶电泳分离的临床意义。 5 综合 基础 2 必做 已开 10 胰岛素对血糖含量的影响及测定 1．熟悉激素对血糖含量的影响因素。，。3-磷酸甘油醛脱氢酶的抑制作用。。。。。(介质、、、)。3.掌握电泳技术的应用，。1.掌握DNA提取、转染、PCR、核酸杂交、DNA重组等生物学技术和方法。2.掌握感受态的转化和鉴定。 7 综合 基础 2 必做 开部分 17 质粒的提取及鉴定 掌握质粒的提取及电泳鉴定的方法 7 综合 基础 2 必做 开部分 18 酶切及酶切鉴定 掌握限制性内切酶的特点及应用。 7 综合 基础 2 必做 开 19 DNA的回收及重组鉴定 学习DNA的回收方法及重组子的连接技术. 7 综合 基础 2 必做 开部分 20 SDS测定蛋白质分子量 在聚丙烯酰胺凝胶中加入阴离子去污剂SDS测定蛋白质的相对分子量。 7 综合 基础 2 必做 已开 21 等电聚焦测测定蛋白质等电点 根据蛋白质在不同pH环境中所带净电荷等于零时，将蛋白质分离。 7 综合 基础 2 必做 未开 22 脂蛋白的分离和提纯 用不同沉淀剂或不同浓度的沉淀剂将脂蛋白分开，分别测定各类脂蛋白。 5 综合 基础 2 选做 未开 23 PCR扩增技术 对提取的基因组DNA进行随机引物PCR扩增，再观察扩增的结果。 6 研究 基础 2 选做 未开 24 Western印迹 应用Western印迹技术，分析经SDS电泳分离并转移到硝酸纤维素薄膜上的特定蛋白质成分。 7 综合 基础 2 选做 未开 25 组织和细胞总RNA提取 学习RNA的制备，分析并了