4第四章 基因克隆的载体-2噬菌体Z.ppt

cos 位点: ?噬菌体黏性末端形成的双链区域。 是包装蛋白的 识别位点。 2、 ?噬菌体的包装条件 DNA + 蛋白外壳 （1）cos位点：包装蛋白的识别位点 （2）包装DNA的大小： 野生型（48.5KB）的75% ～ 105%， 要求λ载体DNA和外源DNA长度之和在36.5～51kb之间。其DNA中约有20kb是非必需区段。 * 第二节 噬菌体载体 （Bacteriophage，简称phage） 核 酸 双链DNA：线性，环形 单链DNA：线性，环形 单链RNA（少） 一、 噬菌体的生物学特性 （Bacteriophage，简称phage） 是感染细菌的病毒的总称。 与质粒相比除具核酸外，多了蛋白外壳。 寄生于细菌细胞中，在脱离寄主细胞后可保持生命，但不能生长、复制。 含有编码多种蛋白质的基因，但一般是利用寄主细胞的核糖体合成蛋白质进行生长增殖。 1. 噬菌体的结构和其核酸类型： 结构：具尾部结构的二十面体型（常见）、 无尾部结构的二十面体型、 线状体型 核酸类型：最常见的是双链线性DNA、 双链DNA：线性，环形 单链DNA：线性，环形 单链RNA（少） 核 酸 不同的噬菌体之间的核酸分子量的差异也是比较大的。大分子量的噬菌体生命周期比较复杂；对寄主的依赖性较低。 2.噬菌体的溶菌生命周期 噬菌体的生命周期分为溶菌周期和溶源周期 只具有溶菌生长周期的噬菌体颗粒叫烈性噬菌体。 烈性噬菌体溶菌生长的基本过程： 1、吸附：吸附到位于感染细胞表面的特殊接受器上 2、注入：噬菌体DNA穿过细胞壁注入寄主细胞 3、转变：被感染的细胞成为制造噬菌体颗粒的场所 4、合成：大量合成噬菌体特有的核酸和蛋白质 5、组装：包装了DNA头部和尾部组装成噬菌体的颗粒 6、释放：合成的子代噬菌体颗粒从寄主细胞内释放出来 1、吸附：吸附到位于感染细胞表面的特殊接受器上 2、注入：噬菌体DNA穿过细胞壁注入寄主细胞 3、转变：被感染的细胞成为制造噬菌体颗粒的场所 4、合成：大量合成噬菌体特有的核酸和蛋白质 5、组装：包装了DNA头部和尾部组装成噬菌体的颗粒 6、释放：合成的子代噬菌体颗粒从寄主细胞内释放出来 3.噬菌体的溶源生命周期 溶源生长周期： 是指在感染过程中没有产生出子代 噬菌体颗粒，噬菌体的DNA是整 合到寄主细胞染色体DNA上，成 为它的一个组成部分。 现知道只有双链DNA的噬菌体才具有溶源周期 温和噬菌体：既能进入溶菌生命周期又能进入溶 源生命周期。 溶源性细菌：具有一种完整的噬菌体基因组的细菌 溶源化： 用温和噬菌体感染细菌培养物使之形成溶 源性细菌的过程 整合： 噬菌体的DNA是被包容在寄主细胞染色体 DNA中 原噬菌体：在溶源细菌内存在的整合的或非整合的 噬菌体 超感染免疫性：溶源性细菌不能够被头一次感染并 使之溶源化的同种噬菌体再感染。 溶源周期： 1、噬菌体的DNA分子注入细菌细胞 2、经过短暂的转录之后，需要合成一种整合酶，于是转录活性被关闭 3、噬菌体的DNA分子插入到细菌染色体基因组DNA上，变成原噬菌体 4、细菌继续生长、增殖，噬菌体的基因作为细菌染色体的一部分进行复制。 1、噬菌体的DNA分子注入细菌细胞 2、经过短暂的转录之后，需要合成一种整合酶，于是转录活性被关闭 3、噬菌体的DNA分子插入到细菌染色体基因组DNA上，变成原噬菌体 4、细菌继续生长、增殖，噬菌体的基因作为细菌染色体的一部分进行复制 溶源噬菌体的诱发： 依赖于阻遏基因与操纵基因的相互作用。阻遏物被一种蛋白酶切割，失活，使噬菌体转录。 需要删除酶将噬菌体的DNA从大肠杆菌染色体上删除下来，使之形成环形的DNA分子，恢复溶源周期开始时的状态。 二、λ噬菌体载体 1、特点 属温和噬菌体，DNA长约48.5kb，为双链DNA（线性，环形）。 含有cos 位点。 -------5‘-CGGGGCGGCGACCTCG-3’