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一例犬细小病毒病诊治报告 　　犬细小病毒病是犬的一种具有高度接触性传染的烈性传染病，临床上以急性出血性肠炎和心肌炎为特征。该病一年四季皆可发生，以发病急、病程短、传染性强、死亡率高为其特点，是危害我国养犬业最为严重的传染病之一[1]。　　1 发病过程及临床症状　　2015年12月，一只3月龄幼犬出现呕吐、腹泻、精神萎靡，粪便有明显血腥味，初步诊断为犬细小病毒病，对病犬进行隔离，进一步采用实验室检查确诊。　　2 实验室检查　　（1）材料：病犬粪便。　　（2）主要仪器及试剂：PCR仪、凝胶成像分析仪、电泳仪等；SDS、蛋白酶K、苯酚、氯仿、无水乙醇、dNTPs、TaqDNA聚合酶（购自TaKaRa公司）。　　（3）方法[2]。①CPV引物：上游引物，5prime;- GTACATTTAAATATGCCAGA -3prime;；下游引物，5prime;- ATTAATGTTCTATCCCATTG -3prime;。②病毒总DNA 的抽提：取1 g粪便，加入1 mL PBS液溶解，静置10 min，12 000 r/min 离心10 min；取上清液500 mu;L，加入50 mu;L 的SDS（10%），20 mu;L蛋白酶K（20 mg/mL），混匀，50 ℃水浴2 h，每20 min 摇匀一次。加入500 mu;L苯酚混匀，静置10 min，12 000 r/min离心10 min；取上清，加入等体积苯酚∶氯仿（1∶1），冰浴5 min，4 ℃ 12 000 r/min 离心5 min；取等体积氯仿冰浴5 min，4 ℃ 12 000 r/min离心5 min；取上清加入2.0～2.5 倍的无水乙醇及1/10体积的3 mol/L 的NaAc 混匀，置-20 ℃ 30 min或过夜，同上离心15 min；弃上清，加1 000 mu;L 75%乙醇，洗涤1 次。晾干EP 管中的DNA，加入30 mu;L的双蒸水溶解，-20 ℃保存备用。③PCR 反应体系与条件。PCR 反应体系：10times;PCR Buffer 2.5 mu;L，dNTPs （2.5 mmol/L）2.0 mu;L，MgCl2 （25 mmol/L）1.0 mu;L，上下游引物（25 pmol/L）各0.5 mu;L，DNA 模板5.0 mu;L，TaqDNA聚合酶（5 U/mu;L）0.2 mu;L，加H2O 至25 mu;L。PCR 反应程序为：95 ℃预变性5 min；95 ℃变性30 s，45 ℃退火30 s，72℃延伸30 s，共35 个循环；末次72 ℃再延伸10 min。反应结束后取7 mu;LPCR产物在1%的琼脂糖凝胶上电泳，在凝胶成像系统上观察。　　（4）结果判定。采用PCR技术进行检测，结果见图1。利用犬二联弱毒苗作为阳性对照，结果显示阳性对照（标记1）与所检病料（标记3）均扩增出470 bp条带，与预期的目的条带大小一致，阴性对照（标记2）无任何条带（图1）。　　3 治疗　　（1）特异抗体治疗：给病犬注射抗犬细小病毒高免血清。　　（2）对症支持治疗：0.9%氯化钠+VC注射液+VB6注射液+地塞米松注射液（剂量参照说明书）静脉注射，另5%糖盐水+氯化钾注射液+头孢（剂量参照说明书）静脉注射。　　（3）辅助治疗措施：给病犬注射干扰素和黄芪多糖。　　经过3 d的治疗，病犬由每天大便4次减少为2次，粪便也逐渐成型。　　4 讨论　　犬细小病毒病在临床多发，一般情况下，犬细小病毒病的治疗周期为5～7 d，个别犬治疗3 d其临床症状基本稳定，也有个别病例需要更长时间，在刚开始治疗的过程中，部分犬临床症状会逐渐明显，此时一定要坚持用药，同时也要结合临床化验检查结果判定有无其他异常，如继发感染其他寄生虫病、病毒病、肠套叠等疾病。　　犬细小病毒病的治疗原则主要是对症支持治疗，加上抗犬细小病毒血清或单克隆抗体等，再配合使用其他药物，如黄芪多糖、干扰素等广谱抗病毒和提高机体抵抗力的药物来提高治愈率。　　在治疗的过程中，早期呕吐频繁，一般建议要禁食禁水，因为犬细小病毒对肠腺隐窝的侵害可引起肠绒毛萎缩，造成胃肠黏膜脱落，此时进食进水会使动物呕吐加重，造成体液丢失和电解质紊乱；同时也会刺激肠胃蠕动、产生胃酸，造成新的损伤；犬患细小病毒病时，剧烈的呕吐腹泻会造成大量体液丢失、电解质紊乱和酸碱平衡失调，治疗时纠正酸碱平衡、补充电解质和体液会对该病的治疗效果产生较大的影响。　　参考文献：　　[1] 郭 伟，商晓桂，单同领，等.犬细小病毒上海分离株全基因的克隆及进化树分析[J].中国动物传染病学报，2009，17（3）：27-32.　　[2] 刘雪燕，黄 韧，刘忠华，等.猫肾F81传代细胞中犬细小病毒原位PCR检测方法[J].中国实验动物学报，2001，9（3）：146-1