应用RT-PCR技术检测宁夏地区马铃薯脱毒试管苗病毒报告.docVIP

应用RT-PCR技术检测宁夏地区马铃薯脱毒试管苗病毒报告 　摘　要：为进一步推动宁夏马铃薯种薯产业健康、稳定和可持续发展，了解宁夏地区马铃薯脱毒试管苗带有病毒残留的基本情况，本研究对宁夏银北和银南地区11个主要的马铃薯脱毒试管苗品种利用RT-PCR技术分别了检测PVX、PVY、PVS和PLRV4种常见病毒。检测结果显示:宁夏银北和银南地区马铃薯脱毒试管苗主要品种均不带有PVX、PVY、PLRV病毒，但是银北和银南地区的庄薯3号均带有带有PVS病毒。 关键词：马铃薯； 种薯； 宁夏； 病毒； RT-PCR 　我国是世界上马铃薯生产第一大国，马铃薯是继小麦、水稻和玉米之后的中国第四大粮食作物，约占世界马铃薯面积的1/4，总产量约占世界的1/5，随着产业结构的调整和马铃薯深加工的兴起，我国马铃薯产业发展迅速，到2007年我国马铃薯种植面积和总产量均跃升至世界首位[1]。 宁夏马铃薯种植面积达到了宁夏总耕地面积的18.0%，马铃薯产业已成为宁夏的主导产业，成为宁夏农民增收的支柱产业，但是马铃薯病毒危害已成为制约马铃薯生产的主要因素之一，马铃薯病毒病是马铃薯上非常重要的一类病害。在我国各马铃薯主产区均有马铃薯病毒病的发生，根相关研究表明[2-3]，我国马铃薯常见病毒为主要有PVX、PVY、PLRV和PVS，马铃薯常见病毒的发生与品种和地区有很大的相关性。病毒病引起马铃薯产生不同程度的产量减少和品质下降，其中产量减少最为严重。 　因此本研究利用RT-PCR技术对宁夏马铃薯主要脱毒试管苗品种进行4种常见病毒的检测，应用PCR法检测病毒的灵敏度是酶联免疫法的104倍，为病毒病害的流行学的研究提供了有价值的数据和手段，也为马铃薯脱毒试管苗的检测和鉴定提供更为快速、灵敏、简便的检测技术[4]。本研究有针对性地为宁夏马铃薯防治病毒病提供可靠的理论依据，有利于宁夏马铃薯种薯产业健康生产和可持续发展，同时也为宁夏马铃薯脱毒试管苗实现一套标准化生产体系提供可靠的技术保障，使得宁夏马铃薯脱毒技术真正意义上达到国内一流。 1　材料与方法 1.1　材料 1.1.1　马铃薯脱毒试管苗　本研究的马铃薯脱毒试管苗来源于宁夏银北和银南地区，主要有克星1号、费乌瑞它、中薯3号、克星18号、黑美人、青薯168、庄薯3号、陇薯3号和夏波蒂等11个品种。 1.1.2　马铃薯病毒试剂盒　本研究的马铃薯PVX、PVY、PLRV和PVS检测病毒的试剂盒均由中国科学院微生物研究所合成和提供。 1.2　马铃薯脱毒试管苗病毒检测的方法　本研究采取RT-PCR技术对马铃薯脱毒试管苗进行检测，首先采用Trizol法提取马铃薯脱毒试管苗的RNA，然后取4 ?g总RNA使用SuperScript III 反转录酶进行cDNA合成，并作为PCR反应的模板。利用中国科学院微生物研究所提供的马铃薯PVX、PVY、PLRV和PVS4种病毒检测试剂盒进行PCR，最后取10μLPCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。 2　结果与分析 2.1　马铃薯脱毒试管苗病毒检测结果　由表1可以看出，宁夏银北和银南地区马铃薯脱毒试管苗均主要品种均不带有PVX、PVY、PLRV病毒，但是银北和银南地区的庄薯3号均带有带有PVS病毒。 　表1 宁夏银北和银南地区马铃薯脱毒试管苗4种病毒检测结果 地 区 品 种 PVX PVY PVS PLRV 银南地区 克星1号 - - - - 庄薯3号 - - - + 青薯168 - - - - 陇薯3号 - - - - 银北地区 费乌瑞它 - - - - 中薯3号 - - - - 陇薯3号 - - - - 夏波蒂 - - - - 黑美人 - - - - 论文代写 青薯168 - - - - 克星18号 - - - - 论文代写 庄薯3号 - - - + 注：+代表检测出病毒，-代表没有检测出病毒。 2.2　PCR扩增结果　以马铃薯脱毒试管苗的CDNA为模板和PVS病毒进行PCR扩增，PCR产物进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，由图1可见：1、2、3、4、6和7号PVS均没有扩增带，只有5号PVS阳性对照可见1条明显的扩增带，8号PVS也没有扩增带，而9号可见1条明显的扩增带，9号的马铃薯脱毒试管苗为银南地区的庄薯3号，由此可见庄薯3号脱毒试管苗带有PVS。 图1　PCR产物电泳图谱 1 2 3 4 5 6 7 8 9 M 毕业论文 注：1为克星1号，2为费乌瑞它，3为中薯3号，4为克星18号，5为阳性对照，6为黑美人，7为青薯168，8为陇薯3号，9为庄薯3号，M为DL2000DNA marker。 3　结论和讨论 3.1　由检测结果可以看出　宁夏地区马铃薯脱毒试管苗的脱毒技术水平达到较高的水平