强制休眠及嗜水气单胞菌暴露对两种不同模式养殖中华鳖非特异性.docVIP

强制休眠及嗜水气单胞菌暴露对两种不同模式养殖中华鳖非特异性 摘要：以仿生态养殖和温室养殖的中华鳖为研究对象，探讨强制休眠和嗜水气单胞菌暴露对2种模式养成的中华鳖血清非特异性免疫的影响，研究发现，相同条件下，仿生态养殖中华鳖血清T-AOC活性显著高于温室养殖中华鳖（P＜0.05），温室养殖中华鳖表现出较高的AKP、ACP活性；强制休眠后的仿生态养殖中华鳖血清SOD、LZM活性极显著高于温室养殖中华鳖（P＜0.01）；水体中致病性嗜水气单胞菌胁迫下，两种模式养殖的中华鳖血清SOD、LZM活性差异不显著（P＞0.05）。结果表明，仿生态养殖中华鳖具有较温室养殖中华鳖更高的抗病能力。 关键词：中华鳖; 嗜水气单胞菌; 强制休眠; 非特异性免疫 中华鳖(Pelodiscus sinensis Wiegmann) 属爬行纲、龟鳖目、鳖科,为我国淡水养殖的重要经济种类[1]。中华鳖养殖模式主要有温室养殖、池塘养殖和生态养殖，但一些人工养殖的鳖肉质粗糙、营养品质下降[2]，且病害日趋严重，可能是养殖模式的差异为中华鳖生存生长提供了不同的环境条件，环境条件的差异直接影响中华鳖的免疫应答[3-4]。本实验通过极端环境条件（强制休眠复苏和嗜水气单胞菌暴露）对中华鳖血清总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）、溶菌酶（LZM）、碱性磷酸酶（AKP）、酸性磷酸酶（ACP）活性影响的研究，探讨养殖模式对中华鳖抗逆性免疫应答的影响，为中华鳖健康养殖提供基础数据和技术支持。 1材料和方法 1.1实验动物与致病菌 仿生态养殖中华鳖和温室养殖中华鳖均购自水产市场，产地青岛。仿生态养殖中华鳖体色土黄、体质健壮、无外伤、平均体质量502plusmn;49 g，共计21只；温室养殖中华鳖体色灰黑、体制健壮、无外伤、平均体质量516plusmn;54 g，共计21只。 实验用致病性嗜水气单胞菌由山东省淡水渔业研究院疫病防控研究室提供，分离自染病鲤鱼。 1.2实验设计 1.2.1强制低温休眠实验选择平均体质量516plusmn;54 g的温室养殖中华鳖9只和平均体质量502plusmn;49 g仿生态养殖中华鳖9只，置4 ℃保鲜冰箱中强制休眠48 h后，取出放置室温（24 ℃）自然恢复其生理机能至正常活动（约2 h）。断头取血，4 ℃静置12 h使血液凝固析出血清（不加抗凝剂），3 000 r/min离心10 min分离血清，置-20 ℃冷冻保存，测定血清T-AOC、SOD、LZM、AKP、ACP活性。 1.2.2致病性嗜水气单胞菌暴露胁迫实验选择平均体质量516plusmn;54 g的温室养殖中华鳖12只和平均体质量502plusmn;49 g仿生态养殖中华鳖12只，参考宋理平等[5]方法，进行致病性嗜水气单胞菌暴露胁迫实验。将温室养殖和仿生态养殖中华鳖1∶1放入3个PVC周转箱（120 cmtimes;80 cmtimes;60 cm，水体100 L），每箱2种中华鳖各4只，在每箱水体中加入10 mL浓度108 CFU/mL的致病性嗜水气单胞菌，每天维持水体致病菌浓度，养殖7 d后，断头取血，4 ℃静置12 h让血液凝固析出血清（不加抗凝剂），3 000 r/min离心10 min分离血清，置-20 ℃冷冻保存，测定血清T-AOC、SOD、LZM、AKP、ACP活性。 1.3指标测定 血清T-AOC、SOD、LZM、AKP、ACP活性均为送样至南京建成生物工程研究所，使用相应试剂盒检测。 1.4数据处理和统计分析 实验结果用“平均值plusmn;标准差”表示，采用SPSS17.0软件对数据进行单因素方差分析和LSD多重比较，P＜0.05表示差异显著，P＜0.01表示差异极显著。 2结果与分析 2.1强制低温休眠恢复时两种养殖模式中华鳖血清非特异性免疫的对比研究 表1数据显示，两种养殖模式下的中华鳖从低温休眠状态恢复直正常活动时的血清非特异性免疫能力具有显著差异，仿生态养殖中华鳖血清T-AOC活性显著高于温室养殖中华鳖（P＜005），且SOD、LZM活性极显著高于温室养殖中华鳖（P＜0.01）；温室养殖的中华鳖血清AKP活性极显著高于仿生态养殖（P＜0.01），ACP活性显著高于仿生态养殖中华鳖（P＜0.05）。 2.2嗜水气单胞菌暴露胁迫对中华鳖致病性的影响 如表2所示,水体致病性嗜水气单胞菌胁迫条件下部分仿生态中华鳖背腹部和四肢有少量溃疡病灶，而温室养殖中华鳖背腹部和四肢溃疡灶较多并有一只死亡。 2.3致病性嗜水气单胞菌暴露胁迫对中华鳖血清非特异性免疫的影响 表3数据显示，水体中致病性嗜水气单胞菌胁迫下仿生态中华鳖血清T-AOC活性极显著高于温室养殖中华鳖（P＜0.01）；两种养殖方式对中华鳖血清SOD、LZM活性无显著影响（P＞0.05）；温室养殖中