微透析—HPLC联用探究干旱胁迫下杨树质外体中特征分析.docVIP

微透析—HPLC联用探究干旱胁迫下杨树质外体中特征分析 　 .Dmo730 { display:none; } 　　植物质外体由细胞膜外侧构成细胞壁的纤维和微晶体空间及充满水和空气的细胞间隙所组成，分化完成的木质部也属于质外体[1]。近年来干旱胁迫条件下，有关植物质外体生理机制的研究越来越受到关注[2，3]，但由于质外体在植物组织中所占的比例相对较小（仅占植物组织总体积的8%～15%），它与膜内细胞质之间存在着水分与物质的平衡，使得植物质外体汁液提取过程操作繁琐、难度大、汁液容易受到污染、不能准确测定其真实成分浓度，所以亟待解决植物质外体汁液研究技术和方法本身的突破 [4]。 　目前普遍采用的提取质外体汁液的离心法、灌注法等方法存在不少缺点，如提取过程中提取液易受到污染，质外体组分会发生变化，无法对局部质外体进行定位研究及测定结果，不能反映质外体内组分的动态变化等[5]。植物质外体，尤其植物地上部质外体的研究方法相对较少，且很不成熟。然而，近年来已广泛应用于动物和人体多种部位取样的微透析取样技术为上述问题带来了希望。 　微透析（MD）技术是一种广泛用于在体分析和连续检测细胞外液的专门透析技术，具有活体、原位取样、实时、在线检测等突出特点[6]。微透析的主要原理是将一种具有半透膜的探针植入生物体内，开动微量注射泵，使灌流液流经探针（通常膜外浓度高于膜内浓度），可透过膜的小分子物质通过扩散进入透析管，灌流液和组织液中的待测物质达到一个动态平衡，收集透析液便可结合高效液相色谱（HPLC）、酶联免疫吸附分析（ELISA）、高效毛细管电泳仪（HPCE）和质谱（MS）等高灵敏度检测仪器测定透析液中组织细胞外液的待测物 毕业论文 http://www.Lw54.coM 　的动态变化[7]。 　脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，有防止细胞脱水的作用。抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸[8]。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。 　1 材料与方法 　1.1 试验材料 　盆栽吴屯杨（Populus wutunensis），荷兰杨（Populus euramericana）和新疆杨（Populus alba var. pyramidalis Bunge）由辽宁省阜新县林业局提供。在4月上旬进行插条，每隔5～7d浇1次0.5L Hoagland 营养液，注意防雨及植株病虫害防治。MD取样和HPLC分析均重复3次。 　1.2 干旱胁迫方法 　干旱处理实验应用的树苗，通过每天用铝盒随机取不同种杨树盆内土样，标记，烘干测量含水量。在每日测量杨树与花盆的总体积，得出3种杨树的日蒸腾量在75～85mL之间。 　1.3 脯氨酸衍生化生化方法 　1.3.1 标样配制：取脯氨酸标准品适量，精密称量，加0.1mol·L-1的盐酸溶液制成每浓度为20.2mg·L-1的溶液，即为对照品储备液。 　1.3.2 标准液：精密量取储备溶液300mu;l，加入1.2%PITC-乙 腈溶液及14%的三乙胺各150mu;l，再加入50%乙腈900mu;l漩涡混匀，室温放置1h后制成样品A，取600mu;l样品A加入正己烷600mu;l萃取，静止分层后精密移取下层液，指定容器中，用流动相A定容，经微孔滤膜（ 0.45mu;m） 滤过，即得。 简历大全 http://www.L/html/jianli/ 　空白液：取0.1mol·L-1的盐酸溶液进行同（1）相同步骤。 　1.4 色谱条件 　日本岛津高效液相色谱仪，配有LC-20AT泵、LC-20AB二极管阵列检测器和岛津液相色谱工作站，岛津Inertsil ODS-SP（250mmtimes;4.6mm，5mu;m）色谱柱；柱温31℃，流动相A：0.05mol·L-1醋酸钠溶液/0.05mol·L-1醋酸钠溶液，流动相B：乙腈-流动相A（1：1）/乙腈-流动相A（1：1），洗脱条件：A：B（50：50），流速：1.0mL·min-1，检测波长：254nm，进样量：20mL 　1.5 微透析探针体外回收率的测定 　体外相对回收率：杨树采用嫩茎微透析取样相同的条件，探针放入已知浓度的脯氨酸下取样，每次取样之前平衡30min后再取样100min后进行检测。测定浓度与标准液浓度之比就是体外相对回收率。本试验重复3次，得到的体外相对回收率为9.5%。 　汁液浓度计算公式： 　C=■ （a） 　式中C是质外体汁液中某离子浓度；C1是原子吸收分光光度计测定的浓度值；10是稀释倍数；0.095是体外相对回收率。 　1.6 数据处理与分析 　试验数据用Excel2007，SPSS17.0进行分析作图。 　2 结果与分析 　2.1 标准曲线 开题报告 http://www