ADH在光敏感核不育水稻中反应.PDF

遗 传 学报，18 3（）：277一251，199几 孟 ．君。C沁n．tico51．fco ADH在光敏感核不育水稻中反应 特征的研究＊ 梅启明 朱英国 （武汉大学生物系430010） 乙醇脱氢酶 A（DH）活性在湖北光敏感核不育水稻 H（PGMR）幼穗发育的育性诱导阶 段对光周期反应非常敏感。此时，在短日照或远红光处理的条件下，乙醇脱氢酶同工酶人dMI 活性高，湖北光敏感核不育水稻原始不育株农垦85雄性可育；在长日照或红光间断长暗期的 条件下，＾dhll活性陡降，表现雄性不育。因此认为Adhll与湖北光敏感核不育水稻育性转 换有关，可能是它参予了育性基因表达的调控作用。 关链词 光敏感核不育水稻，光周期，乙醇脱氢酶，育性转换 乙醇脱氢酶 A（DH，E．C。1．1．1．1）是催化 RcHZO＋NAD＋一 RcHO十NADH＋ H＋反应的氧化还原酶，它在植物体内能解除因糖酵解加强而积累的乙醇和乙醛的毒害 作用，因此，植物体内ADH酶活性的高低与植物体对环境的抗性 有关 G（．Rihcter， 1978）。KoPoKq朋 （1983）用光照诱导玉米变异，发现花粉败育的变异株不能产生ADH 酶。杜尔宾等 （1975）的研究也表明ADH酶与植物雄性不育有关。 湖北光敏感核不育 水稻 H（ubeiphotoperiod一seositiveGenicMale一sterileRice简称HPGMR）经光周期 诱导研究表明，长日照或红光间断长暗期可诱导HPGMR不育，短日照或远红光处理则 可育元（生朝，19尽7；朱英国，1987；梅启明，1989）。那么，其体内ADH酶的反应特征又 怎样？本文以HpGMR，农垦58和正常农垦58对照品种 0（．sa；it，a，subsp．ia户onica L．）为材料，在人工控制光照条件下，对幼穗发育的不同时期叶片中的ADH酶活性及 同工酶的反应特征进行了深人的研究。 材 料 与 方 法 一（）实验材料 HpGMR一农垦58简（称农垦585）和农垦58对照品种 0（。sat萝，a， 、ubsp．JaponicaL．）。 （二）材料处理 盆栽直播，短日照处理诱导其幼穗分化，当幼穗发育至二次枝梗 及颖花原基分化期 按（丁颖，1961年的划分标准）进行各种光照处理 梅（启明、朱英国， 1989）至抽穗。用 坛Kl溶液染色鉴定花粉育性。 （三）取样及样品制备 在解剖镜下分别取幼穗发育不同时期的功能叶 （即植株顶 端第一全展叶）。准确称取鲜叶于研淋中，加人1：5w（／v）预冷的提取缓冲液05（mmol／L 本文于 1989年3月 10日收到。 ，本项研究为国家自然科学基金资助项目。生物系朽级同学张红军参加实验工作，表示家谢。 278 遗 传 学 报 18卷 磷酸缓冲液，pH7.0。内含0.3mol/L甘露醇,lmmol/LEDTA,20mmol/LHEPES,10, mmol/L8-硫基乙醇）匀浆，操作在4℃低温中进行。匀浆在16000xg／分钟，4℃离心． 20分钟，取上清液用于酶活性测定和电泳分析。 （四）酶活性测定 反应液为 7（0mmol/LCly-NaOH缓冲液，PH9.5，内含680 mmol/L乙醇，0.4mmol/LNAD十，5吞一硫基乙醇），反应在25℃进行，反应时取反应液3. ml加。.2m1酶液混合，在752型分光光度计中进行比色，记录 OD340nm／分钟的ODD 值，酶活力以OD340nm ·克鲜重一‘·分一表‘示。 （五）聚丙烯酸胺凝胶电泳 依杨太兴等人 （1982）的方法，采用不连续双层垂直板 凝胶电泳。浓缩胶为pH6.7,Tris-HCI缓冲液，4务胶；分离胶为 pH8.9,Tris-HC1缓 冲液，7.5务胶。稳压7V ·cm-1·5h-‘结束电泳。染色在基数为0.2mol/LpH8.0Tris- HCl46m1,异丙醇4m1,MTT5mg,PMS4mg、最后加人 NAD+37.5mg的混合液中于 37oc避光保温条件下进行，待紫蓝色谱带出现后，用水充分冲洗并照