二艮Ⅲ㈣-无机化学学报.PDF

维普资讯 弓f一 … … 学 报 VO1．14．NO．3 Sept．．1998 溶胶一凝胶法制备的二氧化硅中肌红蛋白的苯胺羟化酶活性 、 京大 二 艮。Ⅲ㈣ 0 用 凝胶制备了多孔透明的二氧化硅包埋肌红 在还原辅酶 钠 黼 索 二氧化硅中的肌红蛋 白保持 了苯胺羟化酶活性 。 傲 二氨亿硅 关键词 肌红蛋白 苯胺羟化酶 一 百五十年前，E~lmen[1首次进行了二氧化硅溶胶一凝胶 (sol—ge1)合成，但是真正的发展 则是在一个世纪以后。Sol—gel化学是在室温条件下溶液中进行的0]。有机母体和无机母体混合 在一起，聚合后生成纳米级复合材料。这种有机一无机复合物在二十年中得到了很大发展：。而 在用 s0j—sel制备的二氧化硅中包埋生物活性物质才剐刚兴起。Braun等于 1990年报道 ]，将酶 包埋在多孔的氧化物基质中，保持了酶的生物活性，并由此可以制得生物催化剂和生物传感 器。此后，这方面的研究工作 日益增多，已扩展到许多生物活性物质，诸如抗体乃至于整个细胞 等：]。 用 sol—gel制备多孔透明的二氧化硅包埋生物分子 ，不仅可以保持生物分子的活性 ，而且 由 于二氧化硅具有多孔性 ，在固定生物大分子 的同时，能允许小的被分析物分子扩散到其中 此 外，二氧化硅 自身的透明性，使得我们方便地用光谱方法监测其中所进行的反应”]。 本文报道利用半人工多酶体系：还原辅酶 I二钠盐(NADH)一黄索单核苷酸(FMN)一肌红蛋 白(Mb)，研究 sol—gel制备的多孔透 明的二氧化硅包埋马心一肌红蛋白的苯胺羟化酶活性 。 l 实验部分 1．1 仪器及试剂 722型分光光度计 (上海第三仪器厂)；高速离心机 (上海 医用仪器厂)；超声波清洗器 (昆 山市超声波仪器厂)。 马心一肌红蛋 白(Mb)，黄素单核苷酸(FMN)Sigma公司}还原辅酶 I二钠盐(NADH)，上海 博奥公司；其他试剂均为分析纯 。 l_2 实验方法和原理 1．2．1 Sol—gel方法制备包埋肌红蛋 白的二氧化硅 (Mb—sol—ge1) 将 10mlTMOS(原硅酸四甲酯)和 2．2ml重蒸馏水以及 0．14ml0．04otol·L 的盐酸混 收稿 日期 收修改稿 日期：1999—0120。 国家 自然科学基金 资助项 目． 通讯联系^ 第一作者；王 威，男，24岁．硬士研究生F研究方 向：生物无机化学。 维普资讯 第 3期 溶胶一凝胶法制备的二氧化硅中肌红蛋白的苯胺羟化酶活性 ·319 · 合 ，超声波振荡 2O分钟 ，冷却至一1O℃后 ，取此溶液2mL与 2mL10mmol·L 磷酸盐的缓冲 溶液 (pH值为6．24，0-4℃)混合 ，加入2O 、2mmol·L Mb溶液，磁力搅拌约 1分钟 ，倒入容 器中 10--20分钟胶凝 ，即得包埋Mb的二氧化硅 (Mb—sol—ge1)口]。于0--4c密闭保存一天，然后 浸入 10mmol·LI1磷酸盐的缓冲溶液(pH值为 7．0)。一部分样品在测试前三天从容器中取 出，置于空气中O～4C保存，这部分样品称作干放样品。 1．2．2 肌红蛋 白的苯胺羟化酶活性 在半人工多酶体系 NADH—FMN—Mb中，Mb具有苯胺羟化酶活性 。在此体系中，NADH作 为电子给体，FMN作为 电子中介体，将Mb从高铁形式 (met—MbFe(Ⅱ))经