浅析食品微生物检测中PCR技术创新应用及探究.docVIP

浅析食品微生物检测中PCR技术创新应用及探究 　摘　要：PCR技术在食品检测的实际应用中表现出速度快、简便、高效等特点，为食品检测技术的发展提供了有力的技术支持，成为调查食品源疾病暴发及鉴定相应病原菌的有效工具。因此，我们应当加大科研力度，组建由各种层次专业人员构成的技术队伍，从而进一步完善食品检测科研管理体系。 论文代写 关键词：食品； PCR； 微生物检测； 模板 PCR技术以其灵敏度高、特异性强以及快速准确等优势在食品检测领域得到愈来愈广泛的应用。PCR技术已成为调查食品源疾病暴发以及鉴定食品源相应病原菌的有效工具。因此，加快发展食品中微生物PCR检测技术是食品微生物检测发展的必然趋势，PCR技术的推广应用，对开展食品检测、防止食源性疾病的危害、与危险性评估都有重要意义。 　　1PCR技术相关概念阐述 　　1.1 PCR技术的发展 　　1.1.1 常规PCR检测 在热稳定DNA聚合酶的催化下，常规PCR检测原理是在存在DNA模板、dNTP、引物、适当缓冲液与MgCl溶溶液的反应混合物中，对一对寡核苷酸引物所界定的DNA片段进行扩增。 　　1.1.2 多重PCR检测 多重PCR(multiplex PCR)的检测原理与传统PCR相同，如果存在与各引物对特异性互补的模板，只不过是在同一反应体系中加入一对以上的特异性引物，那么就可以同时在同一个反应管中扩增出一条以上的目的DNA片段。使用这一方法可以同时检测一个以上目的基因或者借助其交叉限制进行确认。 　　1.1.3 荧光定量PCR 实时荧光定量是将荧光能量传递技术应用于传统多聚酶链式反应仪中，通过受体发色团之间偶极一偶极相互作用。检测PCR过程的荧光讯号便可得知靶序列初始浓度，能量从供体发色团转移到受体发色团，受体荧光染料发射出的荧光讯号强度与DNA产量成正比，从而达到定量目的。 论文代写 　　1.2 PCR技术检测食品微生物的优势 　　1.2.1 准确性 用传统的方法检测食品中微生物要分离出所有的微生物很困难，那是因为，食品中污染微生物种类相当多，即使是同一种食品中微生物种类也相当多。 　　1.2.2 快捷性 一般的腐败菌检测至少需要2～5　ｄ，甚至7　ｄ以上，由此可见，传统的检测方法最大的缺点就是检测需要时间太长了。检验结果出来时通常产品已经流向市场，对实际生产具有严重的滞后性。而PCR技术检测食品微生物可以在一天之内检测出结果，甚至在几个小时就可以得出检测结果，对食品工业生产具有相当好的指导作用。 　　2 PCR检测食品微生物的主要流程 　　2.1 引物设计　　　引物的优劣直接关系到PCR扩增的特异性与成功与否，PCR引物对扩增的特异性起着重要的作用。随着分子生物学的迅速发展，各种微生物的基因序列的逐渐明了，使得引物设计变得更为容易。设计的准确性则取决于对所检测对象的遗传背景的了解。 　　2.2 模板的制备　　　PCR检测方法的可靠性一部分依赖于目标模板的纯度与充足的目标分子数量，绝大部分PCR检测依旧要求富集步骤。 　　3 PCR技术检测食品微生物注意事项 　　3.1 PCR模板的制备　　　食品中有相当多PCR抑制因子，要尽可能地除去(包括DNA提取时蛋白与有机溶剂等的去除)，这一步的好坏直接影响最终检测结果。不管是在提取微生物的核酸，亦或是直接处理食品样品，模板的制备都很重要，尤其是直接处理样品时。 毕业论文 　　3.2 检测对象的生物活性　　　从理论上讲任何可以提供核酸物质的样品都可以进行PCR扩增，这是因为DNA的检测并不代表着一定使用活细胞，这就是说PCR技术不能区分活细胞与死细胞. 　　4 PCR技术在检测食品微生物中的创新应用研究 　　4.1 啤酒腐败菌的鉴定　　　研究发现，凡是能引起啤酒腐败的乳杆菌，均含有似horA基因。我们都知道，啤酒花中的异a酸对绝大部分革兰氏阳性菌有一定的抑菌作用，但是有一些乳酸菌，尤其是乳杆菌对异a酸有抗性，可以在含酒花物质的啤酒中生长，从而造成啤酒的腐败。 　　4.2 水体微生物的检测　　　近几年来人们广泛关注的病原微生物，由此，PCR技术也逐渐应用于水体微生物的检测，尤其应用到是生活水的微生物检测中。例如，贾第虫、军团菌、隐孢子虫，同时还有部分的肠道病毒等的PCR检测方法研究。 　　4.3 食品样品中致病菌的检测　　　使用PCR检测食品中的致病菌，第一步通过离心或者过滤的方法可从样品中获得细菌细胞，抽提DNA；第二步，将细胞裂解，进行核酸纯化，使其符合PCR的技术应用标准。 　　5 结 语 　　综上所述，尽管食品微生物的检测方法有很多种，然而不同食品中微生物检测的方法也存在较大的差异性。随着人们对食品检测的快捷、方便、准确等检测要求日渐加强，对食品中微生物从分子水