培养特性及生物化学反应粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定.PPT

实 验 五　肠杆菌科检验（一） 目的要求 掌握： 肠杆菌科的共同特性和微生物学检查； 肠道杆菌的主要生化反应； 粪便标本中肠道致病菌分离培养的基本程序。 熟悉： 粪便标本中肠道致病菌分离与初步鉴定的操作。 实验内容 微免教研室 西安医学院 病原生物学与免疫学教研室 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学 反应 二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 形态特征（示教） 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 革兰阴性短杆菌，多数有周鞭毛，有荚膜或微荚膜，有菌毛，无芽胞。 故肠道杆菌的染色镜检只能初步判断，不能做为肠道杆菌的鉴别依据。 培养特性及主要生化反应（示教） 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 肠道杆菌营养要求不高，在普通培养基上能生长，大多形成中等大小，表面光滑、形态相似的菌落，因而也不能作为鉴别的依据。但它们生化反应活泼，对糖和蛋白质可产生不同的代谢产物，可借生化反应鉴别各种肠道菌，特别是 肠道致病菌一般不分解乳糖，而非致病菌多数分解乳糖， 临床上常用此特性分离肠道致病菌。 培养特性及主要生化反应 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 常见用于分离培养肠道病原菌的选择或鉴别培养基： S S琼脂平板、 EMB琼脂平板 双糖铁培养基 五糖发酵管（葡乳麦甘蔗） 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 S S 琼脂平板 （沙门志贺菌属琼脂培养基） 分解乳糖细菌，菌落呈红色。 不分解乳糖细菌，菌落无色。 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 2. EMB平板（伊红美蓝琼脂培养基） 分解乳糖细菌 菌落变黑，有金属光泽 不分解乳糖细菌 菌落无色、半透明（粉色） 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 3. 双糖铁培养基 用途： 检测细菌对乳糖和葡萄糖利用能力的不同，是 否产生H2S。 乳糖 葡萄糖 观察方法： 上层含乳糖部分 乳糖发酵：致病菌红色，非致病菌黄色 然后观察下层 发酵葡萄糖（产酸产气） H2S：培养基呈黑色 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 ４. 蛋白胨水培养基（吲哚试验） 组成：蛋白胨水＋色氨酸 原理：某些细菌有色氨酸酶分解色氨酸 产生吲哚（无色），加入柯 氏试剂后形成玫瑰吲哚（红色）。 结果：液面形成玫瑰红色 一、主要肠道杆菌的形态、培养特性及生物化学反应 ５. 微量糖发酵管 几种主要肠道杆菌的鉴别要点 ＋/- － － ＋ － ＋ ＋ ＋ － ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ － ＋ － － － A A ＋ － K A － ＋＋ K A － －/＋ K A － － 菌落蓝紫色、 同前， 圆形、带 菌落 金属光泽、 呈红色。 圆形不透明， 直径2~3mm 左右。 菌落无色、 同前， 半透明、 菌落 直径1～ 常带黑心。 2mm左右。 菌落无色、 同前 半透明、 直径1~2mm 左右。 同上 同前 大 肠 埃希菌 肖 氏 沙门菌 伤 寒 沙门菌 志贺菌 五糖发酵管 葡 乳 麦 甘 蔗 动力 吲哚 双糖铁培养基（KIA） 斜面 底层 气体 H2S乳糖 葡萄糖 鉴别培养基 EMB平板 SS平板 菌 名 二、粪便标本中致病性肠道杆菌的分离鉴定程序 粪便标本或肛拭子 分离培养（划线接种） 第一天 37℃