海南霉素补料工艺探析.docVIP

海南霉素补料工艺探析 　摘　要：通过对海南霉素发酵代谢在线实时曲线, 以及发酵过程中总糖、还原糖、氨基氮、pH、菌浓、菌丝形态、发酵单位等理化指标的分析研究，发现通过补料来补充碳源和氮源可以弥补发酵后期因碳氮比例失调而导致菌丝体断裂、自溶、从而导致产物合成能力衰退。补料可以延长到达发酵终点〔1〕的时间，达到增产增效的目的。 关键词：海南霉素、碳源、氮源、补料工艺 　海南霉素是一种新型的聚醚类抗生素，是从稠李链霉菌〔,8〕东方变种培养物中提取获得的中国自主开发的抗生素兽药，它是一种新型的消化促进剂，主要用来防治鸡球虫病〔2〕和家畜的饲料添加剂，是迄今为止我国唯一批准上市的属一类新药的抗球虫药〔3〕具有活性高、无残留、无抗性等特点,其抗菌活性分别为盐霉素、莫能菌素的10倍和20倍。本实验通过增加补料工艺来控制碳氮比例平衡以达到提高海南霉素发酵单位的目的。 1 材料与方法： 1.1 实验中所用FCD- F2- 0801008 菌种为实验室自技术转让方提供的砂土管保存菌种自然分纯、传代得到的F2 代斜面, 摇瓶发酵单位3500ug/ mL。 1.2 分别采用50L和250L 种子罐作为一二级种子罐，种子罐配方为： 玉米淀粉1.5%，葡萄糖：1.0%，黄豆饼粉：1.0%，硫酸镁：0.05%，磷酸氢二钾0.05%，氯化钠：0.5%。 1.2.1 种子罐工艺 一级种子: 28. 5℃，通风比1:0.8， ,150 转/ 分,周期25-27小时 二级种子: 28. 5℃，通风比1:1， ,200 转/ 分,周期18-20小时 1.2.2 发酵采用6.0m3罐，按3.5 m3计料，消后3.0 m3，发酵罐配方为： ?玉米淀粉：8.0%，葡萄糖：1.0%，黄豆饼粉：1.0%，蛋白胨：0.5%，硫酸镁：0.05%，磷酸氢二钾0.05%，氯化钠：0.5%，酵母粉：0.5%,淀粉酶：0.02%。 1.2.3 发酵工艺 温度: 28℃ ; 罐压: 0.05MPa ;通风比：1：1；溶解氧: 30- 60%; 2、补料采用流加的方式，总补料量为发酵总体积的15%，补料时间通过不同时间的理化指标及效价结果确定。 2.1.1补料配方： 玉米淀粉：1.5%，a-淀粉酶：0.2%，黄豆饼粉：0.5%，泡敌：0.2%。 2.1.2 原材料的灭菌 采用200L罐，按30%比例先将玉米淀粉、黄豆饼粉、泡敌投入罐内，回调pＨ至7.5左右，通蒸汽加热至50℃时加入淀粉酶，升温至80℃恒温糊化15 min，然后升温至120-121℃，消毒30min,降温至28-30℃. 　从非补料工艺的理化指标分析来看，0—24小时为菌体生长阶段，其代谢变化为碳源和氮源等进行分解代谢，菌体进行合成代谢，从而使新菌体不断被合成，菌浓明显增加，菌体生长恒定后生长阶段结束，24小时之后菌体由菌丝生长转为次级代谢，代谢产物为海南霉素。海南霉素发酵过程中, 初级代谢利用葡萄糖时间较长, 造成前期菌体生长过盛; 而转入次级代谢后,碳氮比例偏小, 导致碳源物质不足, 因碳氮比例逐步减小,引起菌体过早衰老， 发酵单位增幅缓慢, 后劲不足，最终放罐效价偏低。当总糖和还原糖比值约为1时，基本达到发酵终点，出现氨基氮回升，pＨ反弹，镜检发现菌丝有自溶现象〔5〕，视野里散落菌丝增多，终点总糖和还原糖明显低于工艺要求，影响产素〔4〕能力，周期延 长20小时生化检测效价降低〔7〕。 　4、补料实验方案：分别将补料开始时间设定为48hr、60hr，补料截止时间均为90hr,跟踪各个实验的代谢过程。 48hr 开始补料的发酵不同时间点的参数变化 时间（h） 0,24,48,72,96,120,140, 总糖（g/100ml） 8.80，7.35，6.88，4.53，3.42，3.00，2.35 氨基氮（mg/100ml）25.6，20.38，18.28，19.96，20.35，20.90，25.78 菌浓（%） 9，24，30，34，34，35，35 pＨ 7.08，7.02，6.89，6.83，6.85，7.16，7.60 效价（ug/ml） - ， - ， 790，2800，3550，4388,4800 　48hr开始补料的代谢特点：总糖和还原糖的量一直比较稳定，补料量基本与糖耗速度相符，发酵过程碳氮比例适中，发酵终点特征明显，pＨ轻微反弹，氨氮略有回升，镜检未见大量散落菌丝，菌丝空胞增多，效价涨幅较好。 60hr 开始补料的发酵不同时间点的参数变化 　 时间（h） 0,24,48,60,96,120,140 总糖（g/100ml） 9.00，7.56，6.60，5.70，4.20，3.20，2.16 氨基氮(mg/100ml） 26.10，21.18，18.20，19.20，18.3