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烟草花药培养探究概述 　摘要 主要从花药培养影响因素、花培幼苗染色体鉴定与加倍、花培品种在生产中的应用3个方面对烟草花药培养研究进行概述，并就培养技术存在的问题和应用前景进行了分析展望。　　关键词 烟草；花药培养；研究概述　　中图分类号 S572 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2016）12-0018-02　　Abstract This paper mainly summarized the research of tobacco anther culture from three aspects，including the factors affecting embryo，the appraisal and double of haploid seedlings and the application of anther culture of varieties in production.Some problems and application perspective were also discussed.　　Key words tobacco；anther culture；research overview　　花药培养是指在合成培养基上，改变花粉的发育途径，使其不形成配子，而像体细胞一样进行分裂、分化、最终发育成完整植株的过程[1]。自从国外[2]首次利用毛蔓陀罗花药进行离体培养获得单倍体植株以来，很多国家相继进行了花药培养方面的研究工作，使该技术在育种工作中不断走向成熟。其可在育种实践中大大加快育种速度，显著提高了选择效果，节省了大量的人力和物力，是目前在育种工作中得到广泛应用的生物技术。因而通过烟草花药培养，对于进一步发展烟草优良品种具有促进作用，进而获得高品质烟叶，提高烟叶的可用性。该文就前人对烟草花药培养的研究进行综述，从花药培养影响因素、花培幼苗的鉴定与加倍、花培品种在生产中的应用3个方面进行阐述，其中花药培养影响因素为主要阐明点。　　1 花药培养影响因素　　1.1 供体材料基因型及花粉发育时期　　供体植株基因型与花药培养效率关系紧密。不同品种烤烟花药萌发率则不同，有的甚至不会萌发。有报道指出同属茄科的茄子在相同培养条件下不同基因型花药培养的胚状体诱导率不同[3]。贾勇炯等[4]在烟草花药培养中诱导胚状体发生的研究中，采用同一培养基诱导K326和Burley21 2个不同类型品种的花药。试验结果表明，烤烟型K326品种平均诱导率明显高于另一晾晒型品种，因此得出，不同基因型烟草品种对花粉胚状体发生频率有一定影响。　　不同时期接种的花粉胚状体萌发率也有所不同。烟草花药培养的最适时期应是生长正常，无病植株的盛花期。前人已有研究表明，大多数植物在单核时期的花粉进行离体培养比较容易培养成功[5]。根据金星、革新一号2个品种的试验表明[6]，花冠与花萼等长的花蕾，花药中的花粉正处于单核靠边的时期，进行培养成胚效果最好，是烟草花药培养的最适时期。　　1.2 预处理　　为了提高胚状体的萌发率，一般情况下在花药接种前需对其进行预处理。预处理有助于细胞脱分化，可提高小孢子的离体培养反应能力。烟草花药的预处理措施主要是通过低温诱导，处理温度一般是0～9 ℃[7]。国外有研究表明[8]，低温预处理不仅能延缓烟草花粉的退化，还能减轻花药药室壁组织的衰老，使更多花粉细胞开始新一轮的繁殖增长，提高花粉的抗逆境性。陈春艳等[9]研究表明，烟草花药在接种前的最适低温预处理时间为48 h，可明显提高胚状体的萌发诱导率。但关于低温预处理对花粉的胚胎发生能力的作用机理，目前却是众说纷纭。有人提出可能是由于低温处理后“异型花粉”的比例增加，因而形成多细胞的机会增多所致[10]，有人认为经低温处理后细胞分裂器发生了某些变化，可能使走向孢子体发育途径的小孢子数量增加。　　1.3 培养基　　1.3.1 基本培养基及激素。在花药培养中，基本培养基对诱导胚状体的发生起着决定性的作用。其中H和MS培养基是最常用的。茄子花药培养以MS效果最好[11]；同属茄科的烟草花药培养最适培养基主要为尼氏H培养基。培养基中含有大量碳源，多为蔗糖和各种常见单糖，在培养过程中承担提供能量和维持渗透压2个功能。其中蔗糖浓度在1%～4%之间花粉粒都能分化成胚，但烟草组培中3%浓度的培养基，花粉粒成胚或出苗百分比都比较高，生长也比较茁壮[6]。　　激素的种类和浓度配比对花药胚状体的诱导和分化具有重大作用。激素成分不同可以使花粉的发育类型不同，影响其是形成胚状体还是愈伤组织；同时，不同激素还可以影响到是体细胞组织的生长增殖还是花粉细胞组织的生长增殖。目前IAA、6-BA、叶酸等激素被普遍应用在烟草花药培养中，且IAA和6-BA激素的已知最适浓度为0.1 mg/L，而其他