猪瘟病毒流行毒株遗传演化分析及免疫对策.docVIP

猪瘟病毒流行毒株遗传演化分析及免疫对策 一、猪瘟与猪瘟病毒概况 1. 猪瘟（CFS）。国际兽医组织（OIE）规定的一类烈性传染病之一。在临床上，以高热稽留，和多器官广泛性出血为主要临床特征。猪是唯一易感动物，不同品种不同日龄的家猪和野猪对猪瘟病毒都是高度易感，根据猪瘟的临床特征和发病程度可将本病分为最急性、急性、慢性、温和型四种。随着我国C 株疫苗（政府规定强制免疫性疾病之一）广泛使用，典型猪瘟在临床上较为少见，症状与病变不典型，在临床上易误诊，这时需要借助实验室手段进行诊断。 未免疫猪瘟疫苗的发病猪，外观看皮肤苍白、贫血，皮肤下有紫色点状出血斑。慢性猪瘟：耳朵皮肤出现坏死。大肠粘膜纽扣状溃疡。急性猪瘟：肠道粘膜大量出血。典型猪瘟：喉头粘膜和扁桃体出血，脾脏边缘出血性梗死。猪瘟：淋巴结出血，呈大理石状。怀孕母猪流产、死胎。 有些病例出现在规模化猪场，在临床上，猪瘟也是造成母猪繁殖障碍的疾病之一。 2. 猪瘟病毒（CFSV）。属于黄病毒科、瘟病毒属，基因组是单股正链RNA 病毒，基因组的全长是有感染性的。猪瘟病毒与牛腹泻病毒有共同抗原。在培养病毒的时候，分离猪瘟病毒尽量用马的提，不用牛的去提。用牛的去提，可能会感染BVDV 病毒, 在猪瘟病毒分离的时候可能会得出假阴性的结果，换成马血清，20%，会很容易解决这个问题。 猪瘟病毒的基因组长约12.3 kb，含有1 个ORF，产生4 个结构蛋白和7 个非结构蛋白，其中猪瘟的E2 蛋白是比较重要的免疫蛋白，可以诱导素产生综合抗体，起到很好的免疫防疫作用。可分为3 个基因型（1 型，2型和3 型），11 个基因亚型（1.1-1.4；2.1-2.3；3.1-3.4）。 二、近年山东地区猪瘟检测与分析 2015 年，山东省地区猪场出栏头数为4 995 万头，位居全国第四位。 近四年，从2013 ～ 2014 年，我们山东地区猪瘟的抗原检测结果，在这四年里我们一共检测了2 634 份猪瘟一次样品，通过PCR 检测和测序分析，其中猪瘟阳性样品421 份，猪瘟抗体的阳性率达到15.98%。 采集了没有免疫的小猪样品和免疫猪瘟疫苗两周后的样品，从时间上来说，可以规避猪瘟毒株，临床感染率为15.98%。2014 年采集了624 份猪瘟一次样品，其中猪瘟抗原阳性样品161 份，猪瘟抗原阳性率达到25.80%，这个数据远远高出近四年的平均水平，因此我们提出假设，在此期间猪瘟病毒发生了一次大的变异，导致这一次的流行。在之后研究中，我们也得到了证实，2014 年前后，猪瘟处于基本稳定状态，也是这个时间段，亚型发生了改变，从2.1 b 变成2.1 d。 2013 ～ 2016 年一共采集了10 002 份血清样品，其中猪瘟抗体阳性样品6 961 份，抗体阳性率达到69.60%，此数据接近合格数（国家农业部规定猪瘟群体的抗体检测结果阳性率达到70% 为合格），2015 和2016 年山东的猪瘟抗体平均水平都超过了70%。根据我们的检测，还有其他大型猪场的猪瘟抗体水平在80 % 以上，一些散养户和小规模猪场的抗体水平相对较低。 三、猪瘟病毒遗传进化分析 在样品检查测序的基础上，近一步做了猪瘟病毒的遗传进化分析，在2014 ～ 2016 年共分离、鉴定28 株猪瘟病毒，并对其中2 株进行了全基因组测序，28 株毒株的E2 基因全部进行测序。 2014 年共分离到10 株猪瘟病毒，其中8 株是2.1 b亚型，2 株是2.1 d 亚型（占总比20 %），2015 年共分离到10 株猪瘟病毒，其中1 株是2.1 b 亚型，9 株是2.1 d亚型（占总比90 %），2014 ～ 2015 年，发生急剧的变化。2016 年上半年共分离到8 株猪瘟病毒，综合测序全部是2.1 d 亚型（100%），2014 年山东地区猪瘟阳性率的急剧上升，与猪瘟毒株的转型是有很大关系的，导致疫苗不完全保护。我们进一步做了猪瘟病毒的遗传进化的分析，从14 年到16 年分离出的猪瘟病毒大部分是2.1 d 亚型，在2014 年以前，少部分毒株是2.1 b 亚型。 2014 年到2015 年猪瘟病毒发生了变异。 猪瘟病毒遗传进化小结与推测：猪瘟病毒2.1 d 亚型已经替代2.1 b 亚型，成为当前猪群新的猪瘟流行毒株。与1.1 亚型的猪瘟兔化弱毒疫苗毒株相比，2.1 d 亚型序列发生了很大程度的变异，其中E2 蛋白的核苷酸同源性只有82% 左右，氨基酸序列同源性不足90%。2.1 d 亚型正朝着远离猪瘟兔化弱毒疫苗的方向进化，那么当前疫苗是否还能够完全保护2.1 d 亚型毒株的攻击。 四、猪瘟病毒2.1 d 亚型免疫攻毒试验 1. 病毒- 血清型中和试验。采用抗疫苗毒株的血清，分别中和猪瘟兔化毒株疫苗和2.1 亚型毒株，在PK-15细胞上测定，中和抗体效