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猪粪便中伊维菌素排泄及降解规律探究 　摘要：通过建立检测猪粪便中伊维菌素含量的HPLC方法，研究伊维菌素在猪粪便中的排泄规律，并在实验室条件下研究光照、温度和微生物因素对猪粪中伊维菌素降解的影响。结果表明，健康育肥猪分别混饲给予30、100、200 mg/kg 的伊维菌素后，可在混饲给药后1 d的猪粪便中检测到伊维菌素，猪粪中伊维菌素排泄量在采食后3.5 d达到最高峰，峰浓度分别为13.58、30.11、52.16 mg/kg，并于144、168、168 h时检测不到伊维菌素。在伊维菌素初始浓度分别为20、40、80 mg/kg的猪粪中，避光条件下，其平均半衰期为126.64 d，而光照条件下的平均半衰期仅为55.16 d。相同伊维菌素浓度的猪粪在15、25、35 ℃时的半衰期随温度升高有缩短趋势，而50 ℃时半衰期较15 ℃时延长。在未灭菌、灭菌及灭菌后添加伊维菌素高效降解菌的情况下，3组的平均半衰期分别为62.9、113.2、33.1 d。由此可见，应重视伊维菌素原形进入环境后的生态毒理学效应，必要时适当延长其休药期，另外还可以通过加强光照、堆肥和添加一定浓度的高效降解菌来加速猪粪中伊维菌素的降解，减少环境中药物的残留。　　关键词：猪粪；伊维菌素；排泄；降解　　中图分类号： S828.6文献标志码： A文章编号：1002-1302（2016）05-0305-03　　伊维菌素是一种广谱、高效、安全和用量小的大环内酯类抗寄生虫药，其应用非常广泛。2003年伊维菌素被注册用于治疗人圆线虫病，在日本伊维菌素被用于控制老人的疥疮突发症[1]。养猪场通过饲喂含伊维菌素的饲料或使用伊维菌素注射液抗猪体内外寄生虫。药物大部分以原形形式随畜禽粪便排出体外，这些含有伊维菌素的粪便直接或以施肥方式进入土壤或水体，导致环境中伊维菌素残留及其耐药菌株的增加。因此，猪场对猪粪的处理方式直接影响药物的环境残留及生态效应。国内外许多文献相继报道阿维菌素类药物在一些动物及水产品体内残留消除规律的研究工作，如阿维菌素在绵羊粪[2]，多拉菌素在犬[3]、猪粪[4]、绵羊粪[2]中残留消除规律，但到目前为止，伊维菌素在猪粪中的残留消除规律的研究未见报道。　　本试验在建立猪粪中伊维菌素HPLC检测方法的基础上，研究商品肉猪饲喂含不同剂量伊维菌素的饲料后猪粪中伊维菌素浓度的变化规律，为伊维菌素药代动力学和生态毒理学方面的研究提供参考。另外，在外界环境中，光照、温度和微生物等因素都会影响化学物质稳定性及环境残留，因此本试验拟在实验室条件下研究光照、温度和微生物因素对猪粪中伊维菌素降解规律的影响，为研究畜禽排泄物作为肥料的安全性及可能对生态环境的影响提供理论依据。　　1材料与方法　　1.1材料　　1.1.1试验动物35日龄体质量、健康状况相近的商品猪40头，购自扬州市邗江区富得养猪场，平均体质量（30plusmn;1）kg。试验前预饲1周，预饲料中不添加任何兽药。　　1.1.2猪粪采集健康猪的新鲜粪样，经检测不含伊维菌素，用于猪粪中伊维菌素降解规律研究。　　1.1.3试剂与仪器伊维菌素原料药，含量97.3%，浙江升华拜克生物股份有限公司产品。乙腈、甲醇均为色谱纯，其他化学试剂均为国产分析纯。高效液相色谱仪（配LC-10ATVP泵、SPD-10ATVP紫外检测器），日本岛津公司产品；ODS-2HYPERSIL（250 mmtimes;4.6 mm，5 mu;m）不锈钢色谱柱，菲罗门科技产品；Agilent SPE固相萃取小柱（500 mg/3 mL），美国Agilent公司产品。　　1.2猪粪中伊维菌素浓度的测定　　样品前处理：取1.0 g猪粪，加入10 mL乙腈，涡旋混合 2 min，超声萃取10 min，5 000 r/min离心10 min，取上清于另一干净离心管中，沉淀再加入5 mL乙腈，按上述方法重复提取1次。混合2次的上清液，在上清液中加入15 mL乙腈饱和的正己烷溶液，混匀后4 ℃静置20 min，弃去分层后的上层正己烷液，取下层液体过固相萃取小柱。固相萃取小柱先用 1 mL 甲醇激活，1 mL水平衡，然后再将下层液体过柱。加30%甲醇水溶液清洗小柱，再用93%甲醇水溶液洗脱。洗脱液13 000 r/min 4 ℃离心10 min，取上清液过滤后待测。　　色谱条件：流动相甲醇 ∶水=93 ∶7（体积比），流速 1 mL/min，检测波长245 nm，柱温30 ℃，进样量20 mu;L。　　1.3试验方法　　1.3.1伊维菌素在猪粪便中的排泄规律将40头猪随机分为4组，每组10头。各组给药情况如下：第1组空白组，即不添加任何兽药，第2～4组分别以含30、100、200 mg/kg伊维菌素的全价饲料饲喂1次。各组猪给药之前采集空白新鲜粪便1次，并在给药后12、2