表达绿色荧光蛋白的重组人偏肺病毒的构建及其致病性的分析研究.pdfVIP

摘 要 人偏肺病毒(Human metapneumovirus,HMPV)属于副粘病毒科偏肺病毒属，是偏 肺病毒属中唯一能感染人类的单股负链不分节段 RNA 病毒。现有流行病学资料显 示，HMPV 呈全球流行，为儿科较为常见的呼吸道病原。临床症状与肺病毒属的呼 吸道合胞病毒(RSV)感染相似，出现严重的咳嗽，气管炎和肺炎，经常伴有高热，肌 痛和呕吐，并导致免疫功能不全者死亡。 HMPV 主要有 A 、B 两型，分别以加拿大分离株 CAN97-83(NL/1/00) 及 CAN98-75(NL/1/99)为代表，每型内又可分为两个不同的亚型。 本研究采用反向遗传学技术，在HMPV NL/ 1/99(B 型)代表株基因组内插入表达 增强绿色荧光的外源基因，成功救获了重组病毒rHMPV NL/1/99-EGFP 。通过荧光 共聚焦、电镜观察及生长动力学研究，证实最终拯救出具有感染性的 rHMPV NL/1/99-EGFP 重组病毒颗粒且救获病毒保持野生型HMPV 的特点。采用改良噬斑 形成试验测定病毒滴度，根据 Reed-Muench 的方法比较分析结果表明，重组病毒 rHMPV NL/1/99-EGFP 与野生型HMPV