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教学目标 简述动物细胞培养的过程、条件及应用。 简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程和应用前景。 重点 动物细胞培养的过程及条件。 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 难点 用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。 1、有关概念: （1）、原代培养：将动物组织消化后的初次 培养。（分瓶前） （2）、传代培养：将贴满瓶壁的需要重新用胰蛋白酶等处理，然后分瓶继续培养，让细胞继续增殖。这样的培养过程称为传代培养。（分瓶后） 在传代培养过程中 10代以前的细胞核型不变 10~50代，增殖逐渐减慢，以至于完全停止，部分细胞的细胞核型可能发生改变 50代以后的部分细胞发生突变，获得不死性，朝着等同于癌细胞的方向发展。 有关概念 1、无菌、无毒的环境（先对培养液、培养器具无菌处理；添加一定量的抗生素，防止污染；定期更换培养液，清除代谢产物) 2、营养 糖（葡萄糖）、氨基酸、促生长因子、无机盐和微 量元素等（合成培养基）；通常需加血清或血浆等天然成分。 3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 1大规模培养生产生物制品（病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体） 2作为基因工程中的受体细胞 3培养的动物细胞可以用于检测有毒物质，判断某种物质的毒性 4培养正常或各种病变的细胞，用于生理、病理、药理等研究，为治疗和预防癌症及其他疾病提供理论依据 植物组织培养和动物细胞培养的比较 获得 快速繁殖、培育无病毒植株 培养目的 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的 细胞 培养基特有成分 、植物激素 葡萄糖、 培养结果 植物体 培养及性质 固体培养基 液体培养基 全能性 增殖 蔗糖 动物血清 细胞株、细胞系 细胞,某些蛋白质 （三） 动物细胞培养技术的应用 资料一： 培养的动物细胞可以用于检测有毒物质。许多致畸、致癌物质加入培养液后，培养细胞会发生染色体结构和数目的变异。根据变异细胞占全部培养细胞的百分数，可以判断某种物质的毒性。现在动物细胞培养已经成为检测有毒物质的快速而灵敏的有效手段。 资料二： 人工关节——软骨再生 1.第一次手术: 从病人关节软骨中未 受力的部分，取出一片约为葡萄干大小的健康软骨组织。 2.分离软骨细胞并经三星期的体外 培养，使细胞数增加约10～20倍。 3.第二次手术: 清理软骨受损的部分，从下方骨头部位取出一片约与伤口大小相同的骨膜，缝在伤口上方，再将软骨细胞注射到骨膜下方。 资料三： 结果: 经过复健一年后即可恢复正常的生活。 二.动物细胞核移植技术和克隆动物 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物） 2、分类 胚胎细胞核移植： 体细胞核移植： 细胞分化程度低，恢复全能性容易 细胞分化程度高，恢复全能性不容易 1 、动物细胞核移植概念： （一）、体细胞核移植的过程： ◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么？ ◆用的是去核的减数第二次分裂中期细胞（MⅡ中期）为什么？ ◆激活方法： ◆激活目的： ◆促融方法：电刺激 ◆胚胎移植至代孕受体内 妊娠、分娩 核移植流程 供体：优质高产奶牛 受体：普通奶牛（卵母细胞的采集与培养） 1.体积大，易操作。2.含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。 有人说它三个母亲，对吗？ 2.核移植的受体细胞 MⅡ中期卵母细胞 用物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育进程。 4.再激活受体细胞，构建重组胚胎方法 1.原理：动物 细胞核 的全能性(不能说动物细胞 全能性)。 3.核移植时，先用 电刺激 使供、受体细胞融合 5.选卵母细胞做受体细胞原因 ①体积大，易操作 ；②含有促使细胞核全能性表达的物质和营养条件。 6.去掉受体卵母细胞的核的原因 保证核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自（有重要利用价值的动物提供的）供体细胞。 8.属无性生殖，基因型不变（与供核动物基因型一致） 7.核移植的供体细胞选用传代10代以内细胞的原因 因为10代以内的细胞一般能保持正常的二倍体核型,保证了供体细胞正常的遗传基础。 9.移植产生的克隆动物与提供细胞核的亲本不100%相同的原因 1)绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA（细胞质遗传）是来自于受体卵母细