BCL-2蛋白高表达PC12细胞系的建立和其对酒精诱导细胞凋亡效应的研究.pdfVIP

摘要 的作用提供依据。 T载体连接， 脂糖凝胶电泳检测产物并回收BCL．2基因。将全长BCL．2基因与pMD．19 I两种限制 DNA进行酶切，切割产物经1％ 性内切酶对质粒pcDNA3．1(．)和重组质粒pMDl9-T-bcl．2 的DNA琼脂糖凝胶电泳分离后，用T4DNA连接酶将所需片段连接，转化、克隆、提 mmoL／L、200mmoL／L、 的方法检测BCL．2蛋白的表达。MTT法测定不同浓度酒精(100 400mmoL／L)对三种PCI2细胞增殖的影响。 T载体连接后， 经PCR和菌液测序证实，BCL一2基因正确且已和 基因和pMD．19 pMD．19 DNA连接酶连接所需片段后，构建出真核表达载体 和peDNA3．1(一)DNA并经T4 Western．blot分别检测BCL．2 mRNA和蛋白的表达，结果显示成功建立了高表达BCL．2 蛋白的PCI2细胞系。MTT结果表明，100mmol／L和200mmol／L酒精浓度时，BCL．2 为100～200 mmol／L范围内，对酒精诱导PCI2细胞的损伤及凋亡的有保护作用。 T 结论1．利用pMD．19 mRNA和蛋白质。 PCI2细胞后，表达高水平BCL．2 2．高表达BCL．2的PCI2细胞能在一定浓度范围内抵抗酒精对细胞凋亡的诱导作 用。 关键字：酒精，BCL．2，克隆，转染，PCI2细胞 U AB STRACT buildthenuclear vectorof withBCL一2 from objective：We expresses cDNAcoloned pcDNA3．1(一)-bcl-2 mouse，thentransfectittOthePCI 2cellandthePCI 2cellwith BCL·2 atlast,which get over-experssion for areused theroleofBCL·2 inalcohol—inducedinthePC12cell． studying protein apopotosis Methods：WeobtianthetotalRNAfrommouse andcolonethecDNA spleen whichreverse transcripted fromthetotalRNA．obtaintheBCL一2DNART-PCRandthe1％DNA linkthe by gelelectrophoresis．We BCL一2tothe 9TVectorandextracttherestructuredDN