BAX基因致人卵巢癌细胞凋亡的实验探究.pdfVIP

·中文论著摘要· BA)(基因致人卵巢癌细胞凋亡的实验研究 研究背景 卵巢癌严重威胁着广大妇女的健康，起病隐匿，尚缺乏有效地预防和筛查手 段，大多数患者就诊时已届晚期，尽管手术、放化疗技术对该病的有效率已达70％， 但大多数病人仍在短期内复发，5年存活率不到30％E11。基因治疗是向肿瘤细胞 引入抑癌基因或促进凋亡基因，以纠正或补偿基因缺陷从而达到治疗目的，．并使 治疗基因在肿瘤细胞内暂时或永久表达，导致肿瘤细胞凋亡或坏死，从而达到杀 伤或抑制肿瘤细胞生长的目的。基因治疗的程序包括治疗目的基因的获得、靶细 胞的选择与培养、载体的选择、将目的基因导入靶细胞、转导细胞的选择和鉴定 以及基因治疗的安全性监测及疗效评价等。 Bcl．2基因即B细胞淋巴瘤／白血病．2基因，是一种原癌基因，它具有抑制凋 亡的作用，目前已经发现了一系列与Bcl．2同源的蛋白，构成Bcl．2基因家族，按 功能分为两类，一类是像Bcl．2一样具有抑制凋亡的作用，另一类是具有促进凋 亡的作用，其中以Bax研究最为广泛，Bax具有强大的促进细胞凋亡作用的基因， 如果能够实现肿瘤细胞Bax基因的高表达，将促进肿瘤细胞的凋亡。故推测应用 基因重组技术构建Bax基因表达质粒，并将重组质粒转入卵巢癌细胞内提高Bax 基因在细胞内的表达可诱导细胞凋亡： 研究目的 检测Bax基因对体外培养的人卵巢癌细胞系Ovcar3的促凋亡作用。 研究方法 采用基因重组技术构建Bax基因表达质粒，经DNA测序鉴定并证实其序列 组、PCDNA3．Bax组。利用脂质体转染法将2种载体转染人卵巢癌细胞系Ovcar3。 应用蛋白印迹法(Western blot)、反转录PCR、流式细胞术、MTT检测转染后各 组细胞中活性Caspase．3蛋白的表达情况、Bax基因表达水平、细胞的凋亡率、细 胞存活率。 研究结果 1、成功构建表达Bax基因的载体PCDNA3．Bax。 blot检测显示 2、Bax基因促进人卵巢癌细胞系Ovcar3凋亡。Westem 平升高，流式细胞检测显示PCDNA3．Bax组细胞凋亡率升高，MTT结果显示 PCDNA3．Bax组细胞存活率低。 研究结论 l、成功构建表达Bax基因的载体PCDNA3．Bax。 2、Bax促进人卵巢癌细胞系Ovcar3凋亡。 ．关键词 卵巢癌；Bax基因；质粒载体构建；转染；基因治疗；细胞凋亡 2 ● 英文论著摘要 ● tocausethe The ofBaxGene experimentalStudy CancerCells ofOvarian Apoptosis Background isaseriousthreattothebroadwomen’S onset，and Ovariancancer health，insidious effective and means．The of stillhasalackof screening majoritypatients prevention and