B7-H4在肺癌及结直肠癌组织中的表达及不同肿瘤患者可溶性B7-H4的检测.pdfVIP

盯一H4在肺癌和结直肠癌组织中的表达及肿瘤患者可溶性 B7一H4的检测 中文摘要 【目的】 B7．H4(B7S1、B7x)是最近发现的B7家族成员，能通过抑制T细胞的增殖、 细胞因子的产生和细胞周期的进程来负性调控T细胞的免疫应答，其在多种肿 瘤组织中的高表达，提示其在肿瘤的发生发展中的作用，并被认为是某些肿瘤的 新型肿瘤标志物。 本文采用免疫组织化学法检测部分肺癌及结直肠癌组织B7．H4的表达，采 用重组小鼠B7．H4(mB7．H4)蛋白作为抗原制备兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体，并 建立检测人可溶性B7．H4(solubleB7．H4，sB7．H4)的ELISA夹心法，并对部分肿 瘤患者血清sB7．H4水平进行检测，以探讨sB7．H4的检测对肿瘤的诊断及预后 的意义，并为研究B7．H4在肿瘤发生、发展中的作用奠定基础。 【方法】 1．肺癌和结直肠癌患者肿瘤组织中B7-H4的表达 采用抗人B7．H4单克隆抗体作为一抗，借助免疫组织化学法检测20例肺 癌和20例结直肠癌患者肿瘤组织中B7．H4的表达。 2．兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体的制备及鉴定 用纯化的重组小鼠B7．H4蛋白作为抗原，免疫家兔，制备兔抗小鼠B7．H4 多克隆抗体，并对其特异性及纯度进行鉴定。 3．sB7．H4 ELISA检测方法的建立 以抗人B7．H4单克隆抗体做为包被抗体，纯化的重组小鼠B7．H4作为参考 标准品，兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体作为捕获抗体，HRP标记羊抗兔IgG作为 二抗，建立检测可溶性B7．H4的ELISA夹心法。 4． 肿瘤患者血清sB7．H4的检测 平进行检测，并以正常体检者血清sB7．H4水平作为对照，分析肿瘤患者与正常 体检者血清sB7．H4浓度的差异。 【结果】 1．肺癌和结直肠癌患者肿瘤组织中B7．H4的表达 通过免疫组织化学法检测20例肺癌和20例结直肠癌肿瘤组织B7．H4的表 达，结果显示B7．H4在肺癌和结直肠癌肿瘤组织中高表达，提示B7．H4可能在 肿瘤的发生、发展中起重要作用。 2．兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体的制备及鉴定 成功制备了兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体，经过半饱和硫酸铵初步纯化后， 合人肿瘤组织中的B7．H4，其纯度及特异性均达到后续试验要求。 3．可溶性B7．H4ELISA检测方法的建立 成功建立了sB7．H4 ELISA检测方法，检测范围在3．13}l∥L～200斗g／L之间， 批内重复性试验和批间重复性试验的变异系数分别为7．92％和11．1％，平均回收 率达到了90．1％，说明该方法的准确度和精密度都较好。 4．肿瘤患者血清B7．H4的检测 用以上建立的方法对630例不同种肿瘤患者血清sB7．H4水平进行了检测， 结果显示肝癌、胃癌、结直肠癌、食管癌、肺癌、鼻咽癌、乳腺癌、宫颈癌、卵 巢癌、恶性淋巴瘤患者血清sB7．H4含量均高于正常对照，而子宫肌瘤、白血病、 多发性骨髓瘤患者血清sB7．H4与正常对照无差异。 【结论】 证实了B7．H4在肺癌及肠癌组织中高表达，其表达程度与肿瘤的病例分型 和患者的临床分期相关；成功制备了兔抗小鼠B7．H4多克隆抗体，建立了检测 sB7．H4的ELISA夹心法；初步证实了sB7．H4在多种肿瘤患者血清中含量增高。 提示B7．H4有望作为一种肿瘤标志物，但有关B7．H4在肿瘤的发生发展中的作 2 用机制尚需进一步探讨。 【关键词】B7．H4；共抑制分子；抗体制备；ELISA夹心法；肿瘤； 肺癌；结直肠癌 IⅢ6．6l 【中图分类号】l也92．33 R730．43 【文献标识码】A Abstract 【objective】 B7一H4isa id训fied m锄b盯tllat adl reC饥tly B7缸lily neg撕Velyregulat豁T ofTcen