B7-H1基因沉默对结肠癌细胞生长的抑制作用及对CIK细胞杀伤活性的影响.pdfVIP

lIHI I III II1 1111 1 11111 YI 目 录 一、摘要 中文结构式摘要…………………………………………………………………··l 英文结构式摘要……………………………………………………………………4 二、英文缩略语…………………………………………………………………………7 三、论文 前言…………………………………………………………………………………………………………·9日Ⅱ舌…………………………………………………………………………………………………………。9 材料与方法………………………………………………………………………10 结果………………………………………………………………………………………………………”17 讨论………………………………………………………………………………………………………”26 结论………………………………………………………………………………………………………”28 四、本研究创新性的自我评价………………………………………………………29 五、参考文献…………………………………………………………………………30 六、附录 综述………………………………………………………………………………………………………“32 在学期间科研成绩………………………………………………………………·40 致谢………………………………………………………………………………………………………“41 个人简介…………………………………………………………………………42 ·中文论著摘要· B7．HI基因沉默对结肠癌细胞生长的抑制作用和对 CIK细胞杀伤活性的影响 目 的 了解肿瘤的免疫抑制机理、打破肿瘤免疫抑制是当今肿瘤免疫治疗的重要和 前沿课题。B7．H1／PD．1是肿瘤细胞最主要的负性调节通路之一，B7．H1作为共刺 激分子B7家族成员在肿瘤细胞上表达，能够通过受体(如PD．1)诱导初始T细 胞增殖，抑制已活化T细胞的增殖和分化，促使其凋亡；PD．1在T细胞的活化后 期表达。但是，此通路在肿瘤的发生、发展的何时开始发挥作用，以及如何发挥 作用，确切的机理仍然不清。CIK细胞是临床上最为常用的免疫活性细胞，其中 有没有能够避开B7．H1／PD．1抑制途径的细胞亚群，或者通过怎样的方法能够解除 这种抑制、增强CIK细胞的杀伤活性，仍然不明了，也未见相关的报道。 方法 采用免疫组织化学染色法检测46例结肠癌、20例结肠腺瘤性息肉及28例结肠 慢性炎症患者组织中B7．H1基因的表达，并与临床资料比较，对其中46例结肠癌 患者进行电话随访；应用细胞免疫化学染色法检测4株结肠癌细胞及1株人脐静脉 内皮细胞中B7．H1蛋白水平的表达；针对B7．H1设计合成RNA干扰片段，连接到 16细胞 内，应用RT-PCR、Real-timePCR及Westernblot方法检测转染前后细胞内 B7．HlmRNA和蛋白水平的表达抑制率；应用流式细胞术检测转染前后肿瘤细胞周 期的变化，同时对转染前后的细胞连续培养7天，应用MTT法绘制细胞生长曲线； 选取培养第O、7、14、2l天的CIK细胞应用流式细胞术检测CIK细胞免疫表型的变 化，同时检测CⅨ细胞上PD．1的表达；选取转染前后的肿瘤细胞与CIK细胞进行共 同培养，设置不同效靶比，观察24、48及72小时后CIK细胞对肿瘤细胞的体外杀 伤活性。 结果 B7-H1在结肠癌组织、腺瘤性息肉及炎症组织的表达率分别为48．39％、10％、 10．71％，在结肠癌组织的表达显著高于腺瘤性息肉及慢性炎症组织(p，o．001)， 但与患者年龄、性别、分化程度、浸润程度、临床分期及淋巴结转移无显著相关 性；4株结肠癌细胞中，B7．H1在HCT