江南大学微生物研究生复试内容.doc

2005微生物实验操作复试 1有哪些方法可以提高显微镜的分辨率？ 答：显微镜的分辨率（Resolving power）是指显微镜将样品上相互接近的两点清晰分辨出来的能力。其用镜头所能分辨出的两点间的最小距离表示，距离越小，分辨能力越好。可用公式表示： 物镜的数值口径（Numberical aperture），简写为（N.A）：表示从聚光镜发出的锥形光柱照射在观察标本上，能被物镜所聚集的量。可用公式表示： n——标本和物镜之间介质的折射率 θ——由光源投射到透镜上的光线和光轴之间的最大夹角 可见物镜的分辨率是由物镜的NA值与照明光源的波长两个因素决定。NA值越大，照明光线波长越短，则D值越小，分辨率就越高。要提高分辨率，即减小D值，可采取以下措施: （1） 降低波长λ值，使用短波长光源。（2）增大介质n值以提高NA值（NA=nsinu/2）。（3） 增大孔径角θ值以提高NA值。（4） 增加明暗反差。 2革兰氏染色的步骤？哪几步最为关键？ 答：（1）1、细菌的活化：将细菌接种营养琼脂斜面，培养16-24h。 2、制片：取菌种培养物常规涂片、干燥、固定。 3、初染：于制片上滴加结晶紫染液，染色1min后，用水洗去剩余染料。 4、媒染：用碘液冲去残水，并用碘液覆盖约1min，水洗。 5、脱色：用滤纸吸去玻片上的残水，将玻片倾斜，在白色背景下，直接用95%乙醇从载玻片上端冲洗脱色，直到流下的酒精无明显紫色时，立即水洗。 6、复染：滴加番红液，染色2min，水洗 7、用滤纸吸干，油镜镜检。 （2）脱色是革兰氏染色中最为关键的步骤，其中乙醇的浓度，用量及涂片厚度都会影响脱色速度，最终影响观察效果。如果脱色过度，有可能会使革兰氏阳性菌呈假阴性如果脱色不够，有可能使革兰氏阴性菌呈假阳性 答：1）杀死微生物，固定细胞结构。?2）保证菌体能更牢的粘附在载玻片上，防止标本被水冲洗掉。?3）改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。? 注意问题：温度以载玻片接触手背，手背不觉得烫为宜 4同一酵母菌培养液用血球计数板和平板菌落计数法同时计数，所得结果是否一样？为什么？进一步比较两种计数法的优缺点？ 答：所得结果不一样。血球计数板记得的菌体数是活菌体和死菌体的总和，而平板菌落计数法记得的是活菌体的量。 血球计数板优点是直观、快速，方便，但该法计数的是样品中的总菌落数，无法计数活菌数。平板菌落计数法的优点是能粗出样品中的活菌数，缺点是手续较繁，而且测定值常受各种因素的影响。 5如何测定水中的大肠菌群数？测定水中大肠菌群数有什么实际意义？ 答：大肠菌群系指一群能发酵乳糖，产酸产气，需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌 检测意义：水中的病原菌多数来源于病人和病畜的粪便，由于病原菌的数量少，检测过程复杂，因此，直接测它们的存在非常困难。由于大肠杆菌在粪便中数量大，在体外存活时间与肠道致病菌相近，而且检测方法比较简便，因此采用测定大肠菌群或大肠杆菌的数量来作为水被粪便污染的标志。如果水中大肠菌群菌数超过一定数量，则说明此水已被粪便污染，肯能还有病原菌。 6高压蒸汽灭菌的基本原理以及步骤 答：高压蒸汽灭菌是将物品放在密闭的高压蒸汽灭菌锅内，在一定压力下保持15-30分钟进行灭菌。将待灭菌的物品放在一个密闭的加压锅内，通过加热，是灭菌锅内夹套间的水沸腾而产生蒸汽，待水蒸气急剧的将锅内冷空气从排气阀中排尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内压力，从而使沸点增高，获得高于100°C的温度，导致菌体蛋白凝固变性而达到灭菌的目的。 具体步骤：①.加水②装料③加盖④排气⑤升压⑥保压⑦降压⑧无菌检查 7如何制备大肠杆菌感受态细胞？ 答：感受态细胞就是细菌最容易实现转化的状态。感受态细胞可以通过理化因素诱导产生，其中制备大肠杆菌感受态最常用的方法是CaCl2法。将细胞置于0℃的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞会膨胀成球形，细胞膜的通透性会发生改变。此外还可以应用PEG法和电击法，其中电击法可以实现大肠杆菌较高效率的转化。 步骤：1、挑取大肠杆菌新鲜菌落于LB液体培养基中，37℃振荡培养过夜。 2、取0.2ml培养液于含50mlLB培养液的三角瓶中，37℃震荡培养至OD值为0.3-0.4，于冰水中迅速冷却。 3、菌液置预冷的离心管中冰浴15min，于4℃，4000r/min离心5min，弃去上清液，加入预冷MgCl2-CaCl2溶液20ml，于冰水中放置15min。 4、于4℃，4000r/min离心5min，弃去上清液，用预冷CaCl2溶液2ml悬浮菌体。于冰水中放置15min，分装至离心管中，每管200ul。 8简述移液管和培养皿的包扎注意事项 答：1、培养皿：包扎前洗净烘