CCTγ在BGC-823细胞中的生物学功能及及TFF3关系探讨.pdfVIP

摘要 摘要 在恶性肿瘤中，胃癌的发生率居高不下，是全世界范围内发病率最高的癌症 之一，癌症的发生是一个多基因、多阶段、渐进性进行的复杂过程，细胞凋亡、 增殖调控异常参与肿瘤的发生和发展，TFF3是主要由胃肠道黏膜分泌的一种小 分子粘膜分泌蛋白，在胃肠道黏膜保护及肿瘤形成中的作用逐渐成为大家关心和 研究的热点之一；CCT是真核生物细胞质之中唯一的伴侣素，主要帮助新生的蛋 白质多肽链完成正确的折叠，从而发挥它们相应的功能，其结合底物目前研究比 较透彻的有肌动蛋白、微管蛋白等，而近年来的研究发现各种恶性肿瘤中CCT的 表达明显升高，推测CcT在肿瘤的发生发展中也发挥着一定功能。本实验组前期 研究通过酵母双杂交的方法正反向验证了TFF3和CCT丫二者的结合，所以我们猜 测TFF3是否也是在CCTY的协助下才得以折叠成具有三叶草结构的小分子肽，从 而促进了胃癌的发生发展?因此，本实验首次在胃癌细胞系BGC．823中从分子生 物学水平对二者结合性进一步探讨，并初步研究CC研对胃癌细胞生物学功能的 影响。 首先通过构建Myc．CCT丫及HA．TFF3的质粒，利用免疫荧光共聚焦技术探索 二者在HEK．293T细胞中的共定位，并采用免疫共沉淀的方法验证二者的结合情 况。其次构建CCT丫的干扰质粒，用干扰质粒稳定转染BGC．823细胞，并对获得 果；并进一步应用划痕实验、TransweIl，J、室实验、CCK．8及流式细胞计数技术分 析CCT丫干扰细胞株的迁移、侵袭、增殖能力及凋亡水平的变化，由此考查CCTY 在肿瘤细胞中的生物学作用。 通过上述实验，我们发现，TFF3和CCTY的免疫荧光共聚焦具有空间的共 定位，但通过免疫共沉淀实验我们未看到二者明显的结合条带，CCn基因沉默 后能够明显抑制BGC．823细胞的迁移能力、侵袭能力，生长活性，而凋亡水平 上升。这些结论不仅进一步明确了TFF3和CCn的相互关系，而且第一次初步 探讨CCT丫在胃癌细胞株BGC．823中的生物学功能，从而为胃癌的靶向治疗提 供新的方向。 关键词：TFF3；CCn；胃癌； Abs仃act Abstract In incidence tumor，the ofstomachcancerremains isoneof malignant hi曲，It the incidence cancerintheworld．Cancer hi曲est isacomplicatedprocess，Abnomal cell and roleinthe and apoptosisproIiferation regulationplay粕importantorigin ofthetumor-TFF3isasmall deVelopment moleculemucosalsecrete whichis protein secretedthe mucosa．Therolein mainly by tract gastrointestinal gastmintestinal mucous membrane andtumorfomationof protection TFF3becomesthehot