IL-17对小鼠心肌细胞中单核细胞趋化蛋白-1表达的作用.pdf

中文摘要 IL-17对小鼠心肌细胞中单核细胞趋化 蛋白一1表达的影响 研究生 刘艳月 导师 沈燕 郑州大学第一临床学院 河南 郑州450052 摘 要 背景与目的 心肌炎是以心肌细胞的变性、坏死及单个核细胞浸润为特征的一种炎症疾 病。心肌炎可由多种病因引起，其中最常见的是病毒感染引起的病毒性心肌炎 (viral 生命健康。VMC的发病机制目前还不完全清楚，通常认为在病毒感染初期，病 毒可直接侵害心肌，但严重的慢性持久的心肌病变主要是由自身免疫介导的。 细胞因子。IL．17可以通过诱导其他炎症因子的表达，介导炎症细胞到局部的浸 润及组织损伤，在炎症性疾病尤其是自身免疫性疾病中发挥重要作用。单核细 chemoattractant 胞趋化蛋白．1(monocyte protein．1，MCP．1)是最早发现的CC 类趋化因子家族的成员，MCP．1对单核细胞有很强趋化活性，有关其在炎症性 疾病中的作用一直很受人们关注，有研究显示，MCP．1是诱发VMC心肌组织炎 症细胞浸润的重要机制之一。 IL．17可通过诱导多种细胞产生MCP．1来介导单 个核细胞迁移，参与炎症反应，且Thl7细胞及IL．17被证实与VMC的发生和 发展密切相关，但对于IL．17是否可以通过诱导心肌细胞MCP．1的表达来介导 中文摘要 炎症细胞向心肌组织的浸润而参与VMC的病程发展尚未见文献报道。 本研究首先检测心肌细胞是否存在IL．17受体(Interleukin．17 receptor， 中的作用机制提供实验依据。 方法 (1)差速贴壁法分离乳鼠心肌细胞进行原代培养。 的表达情况，对RT-PCR扩增产物电泳后进行灰度扫描，半定量分析心肌细胞中 MCP．1 mRNA表达的变化。 的表达情况。 IL广17+同型IgG对照组和空白对照组4组：并且设有IL．17处理的量效组和时效 组各6组；实验均重复3次。 (5)用SPSSl7．0软件对数据进行统计学分析，实验数据用均数±标准差表 示，组问比较采用单因素方差分析，检验水准a=0．05。 结果 (1)成功实现乳鼠心肌细胞的原代培养，经形态和搏动观察，确定心肌细 胞的纯度95％。 (2)利用IL一17RA的特异性引物进行PCR扩增，扩增产物经电泳后检测 到目的条带，表明心肌细胞中有IL．17RA的基因表达。 mRNA IL．17处理心肌细胞8h，结果表明MCP．1 (3)以终浓度50ng／mL 和蛋白的表达均升高，同空白对照组相比差异均有统计学意义(尸0．05)；以终 果发现MCP．1 mRNA和蛋白的表达同空白对照组相比差异无统计学意义俨 mRNA和蛋 白的表达均升高，同空白对照组和IL．17+抗．IL．17单克隆抗体处理组相比差异 II 中文摘要 上调心肌细胞MCP．1的表达具有特异性。 (4)以终浓度分别为l，5，10，50，100 h， ng／mL的IL．17刺激心肌细胞24 MCP．1mRNA和蛋白的表达基本呈浓度依赖式升高，且各浓度组与不加刺激因 子的对照组相比差异有统计学意义俨0．05)；以终浓度为50ng／mL的IL．17分 别刺激心肌