花生膜联蛋白基因AhAnn1的克隆与表达分析.pdfVIP

华北农学报 ·2017,32(3):21-26 花生膜联蛋白基因AhAnn1 的克隆与表达分析 丁　 红,戴良香,秦斐斐,慈敦伟,宋文武,张智猛 (山东省花生研究所,山东 青岛　 266100) 　 　 摘要:为挖掘花生抗逆境胁迫相关基因,克隆抗逆相关膜联蛋白Annexin基因,以花生品种花育25 号为试验材 料,从已知抑制消减杂交文库中获得花生膜联蛋白Annexin类似基因片段,通过RACE技术获得Annexin基因5′-RACE 片段。 对5′-RACE序列和抑制消减杂交文库中已知基因片段进行拼接,设计特异引物通过逆转录-聚合酶链式反应 (RT-PCR)扩增得到该基因,命名为AhAnn1。 结果表明,AhAnn1全长为1277 bp,开放阅读框为951 bp。 根据编码区 预测AhAnn1编码一条316个氨基酸组成的多肽,预测分子量为36.10 kDa,等电点为7.07。 预测该基因编码的蛋白 含有膜联蛋白Annexin保守结构域,定位于细胞质中。 蛋白序列多重比对和系统发育分析表明,花生与大豆、苜蓿、鹰 嘴豆等豆科植物中的膜联蛋白相似性最高,亲缘关系最近。 荧光实时定量PCR结果显示,AhAnn1在根系和叶片中的 表达量随干旱胁迫程度的增加而增加。 由此推测AhAnn1是一种干旱胁迫应答基因,在花生逆境调控中发挥作用。 结果为进一步研究花生AhAnn1基因的功能和花生抗逆境胁迫相关分子机理提供了理论基础。 关键词:花生;膜联蛋白基因;干旱;系统发育分析;荧光定量PCR 中图分类号:Q78;S565.03　 　 文献标识码:A　 　 文章编号:1000-7091(2017)03-0021-06 doi :10.7668/ hbnxb.2017.03.004 Cloning and Expression ofAhAnn1 Gene in Peanut DING Hong,DAI Liangxiang,QIN Feifei,CI Dunwei,SONG Wenwu,ZHANGZhimeng (Shandong Peanut Research Institute,Qingdao　 266100,China) Abstract:The aim of this study was to screenAnnexin genes related to stress resistance in peanut.AAnnexin gene was cloned from the peanut (Huayu 25),named AhAnn1 using RACE technology and RT-PCR.The peanut Annexin like gene was obtained from drought related suppression subtractive hybridization cDNA library in peanut root.The whole sequenceofAhAnn1was1277 bpanditsopenreadingframewas951bp,encodingapolypeptideof 316 aminoacids,withatheoreticalmolecularweightof36.10 kDaandanisoelectricpoint(pI)of7.07.Theprotein was predicted to be located in cytoplasm,containing the conserved Annexin domain.Multiple sequence alignments and phylogenetic analysis of Annexin proteins indicated AhAnn1was most similar with Annexin from Glycine max, Medicago truncatula and Cicerarietinum.Theresultsof Real-time RT-PCRshowedthattheexpressionofAhAnn1 in roots and leaves increased with the increase o