海带配子体克隆培养技术的研究.pdfVIP

海带配子体克隆培养技术研究 2．2海带配子体的形态特征 在海带的整个生活史中，配子体存在的时间很短，在适宜的条件下只有两个星期 左右。 成长的雌配子体多数为一个细胞的藻体，但也有几个细胞的。单个细胞形成的雌 配子体多为球形或梨形，直径1卜22 um。最初几天，色素较淡，以后色素加深，迅速 变为棕褐色。 um。 雄配子体一般由多个细胞组成，细胞较雌配子体的小，直径为5-8 3海带配子体克隆技术的应用及研究概况 3．1海带配子体克隆技术的建立 1964年，Yabu报道了海带雌雄配子体分离培养的结果【l”，Yabu发现分离培养能 大大促进配子体的有丝分裂，不同的营养盐也可促进雌配子体的细胞分裂。 我国的海带配子体克隆即无性繁殖系技术于二十世纪七十年代末建立。方宗熙先 生等【l5】发现在人为的分离培养条件下，在某些物理化学条件下如维生素c处理Il“、低 温的连续光照和较高温度【l。7】等，雌雄配子体都可由单细胞或少数细胞组成的简单分枝 体而长成复杂的分枝体或簇状体，用机械方法将分枝体或簇状体粉碎后，进行培养， 这些个体在适宜的条件下，又能继续进行营养生长，经过一段时间后，又都能长成复 杂的分枝体或簇状体，这样就出现了海带配子体的无性繁殖系(即克隆)US]o海带配 子体克隆技术的建立在种质资源的保存、分子生物学、遗传学、海带育种及育苗等方 面都有重要价值。 3．2海带配子体克隆技术的应用 由于海带配子体克隆具有遗传性一致、发育全能性、在适宜条件下可以长期进行 营养生长和保存的特点，使其在种质资源的保护、生理生化及遗传学研究、育种、苗 种生产中都具有重要意义。 3．2．1海带配子体克隆在种质资源中的应用 由于海带配子体世代在海带的生活史中只有两周左右的时间，使得有关海带配子 体的研究受到季节性的限制。海带配子体克隆技术的建立，为海带遗传育种和各项生 理、生化实验提供了方便，也使配子体的长期保存成为可能。目前主要的海带配子体 克隆保存方法有如下几种：继代培养法、低温弱光保存法【l”、长光照保存法。 对自然界的生物来说，保护天然群体的基因库，维持生物多样性是种质资源开发 和保护的主题之一t19-20】。海带配子体克隆长期保存技术的建立，为海带种质库的建设 提供了切实的技术保证，这种能够长期保存并保留其遗传特性及发育全能性的特点， 对种质资源的保护、遗传多样性的研究及育种工作具有重要的意义。 3．2．2海带配子体克隆在生理、生化和遗传学研究中的应用 海带配子体克隆是研究海带生理、生化、遗传的手段之一，以配子体克隆为研究 对象，不但比孢子体更方便、容易培养，而且节约时间和设备，易于较快地取得成果。 海带配子体克隆培养技术研究 另外，海带配子体克隆亦是进行海带原生质体培养研究的方便材料【2”。 物生长激素[29-341和其他因素对海带配子体克隆的影响135-36]。 克隆的遗传基础纯一，且细胞壁中多糖含量较少，有利于细胞内含物质的分离与 提纯，因此在分子生物学研究中有特殊的意义口”。海带配子体克隆的6种同工酶分析 表明，日本海带比中国海带种群间的多样性水平高，对于中国海带与日本海带亲缘关 系的鉴定有一定的作用|3…。海带配子体克隆的蛋白酶活性最适PH值为8．0，同时发 由于海带孢子体组织培养技术尚不完善，以孢子体为研究对象品种不够丰富，且海带 细胞富含多糖物质在技术上对DNA的提取、纯化也有一定的难度，而利用配子体克隆 提取DNA，用分子标记技术，获得种(品)系的特征图谱，建立其“基因图谱”，用以 研究海带遗传多样性和辅助育种，是一项可靠有效的方法口”。 3．2．3海带配子体克隆在育种中的应用 3．2．3．1单倍体育种 海带配子体克隆在分离培养条件下，经过较长时间的营养生长后，雌、雄配子体 克隆在适宜条件下如从连续光照转入正常光照、从较高温度转入较低温度【l6】仍能正常 发育为孢子体植株。 3．2．31．1雄配子体单性生殖一无配生殖 海带的无配生殖是指雄配子体细胞不形成配子，而直接发育成叶状体mJ。1979年， 蒋本禹[41】等报道了由海带雄配子体培育出成熟的大孢子体，并能产生孢子。戴继勋等 um左右，顶部细胞或