SELDI-TOF-MS技术对大肠癌裸鼠动物模型早期蛋白组学探究.pdfVIP

目 录 SELDI-TOF-MS 技术对大肠癌裸鼠动物模型 1 早期蛋白组学研究 1.1 中文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„1 1.2 英文摘要„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„3 1.3 前言„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„5 1.4 材料与方法„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„7 1.5 结果„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„12 1.6 讨论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„24 1.7 结论„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„30 1.8 参考文献„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„31 1.9 英汉缩略词对照表„„„„„„„„„„„„„„„„„35 2 研究生期间所发表的论文„„„„„„„„„„„„„„36 3 致谢„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„„36 SELDI-TOF-MS 技术对大肠癌裸鼠动物模型 早期蛋白组学研究 中 文 摘 要 目的：利用结肠癌细胞悬液皮下接种balb/c 裸小鼠，构建 HCT-116 人 结肠癌裸鼠动物模型，观测时间与移植瘤大小变化，检测分析接种后不同 时期裸鼠体内微量蛋白谱的变化，寻找差异蛋白，探索大肠癌的病因和发 病机制。 方法：1 模型的构建：复苏培养 HCT-116 大肠癌细胞，收集第 3-5 代 7 对数生长期细胞，将细胞悬液调至密度 1×10 /ml ，皮下以 0.1ml 接种于 10 只 3-4 周龄裸鼠背部皮下,每隔十天测量瘤体大小并记录.对照组同时用 0.1ml 1640 培养基液接种。实验组和对照组裸鼠分别在接种后 20d、40d 和 60d 取血，前两次采用断尾法取血 0.1ml，最后一次采用摘眼球取血 05ml 后处死裸鼠并剥离瘤体，测量瘤体体积,剥离的瘤体立即送病理科进行病理 切片检查。所取血液标本立即 4 ℃ 3 000 rpm 离心 5 min，将分离的血清 分装 3 管，30 μL/管并进行编号，立即冻存于 -80℃ 冰箱中备用。2 蛋白 组学检测与分析：利用 SELDI-TOF-MS 技术对裸鼠血清进行微量蛋白分 析，将获得的微量蛋白质谱图用 Ciphergen ProteinChip 3.0 软件进行数据 的校正和分析，采用 Ciphergen Biomaker Wizard 3.1 软件筛选大肠癌微量 差异蛋白,并对筛选出的差异蛋白在蛋白数据库中比对 。 结果：裸鼠皮下接种后 15 天长出肿瘤，成瘤率 100%。筛选出了 5 个 差异蛋白（p0.01），其分子量分别为2357Da、2424Da、2637Da、8183Da 10133Da。其中2637Da、8183Da 10133Da 三种微量蛋白在接种后裸鼠体 内表达逐渐增强，2357Da ，2424Da 两种微量蛋白在接种后裸鼠体内表达 逐渐减弱，并在 Swiss-Prot 蛋白库中进行数据检索 ，初步鉴定为 Reactive oxygen species modulator 1 、Leukocyte-specific transcript 1 protein 、 Brevinin-2R 、Prosalusin 、Calcitonin 。在肿瘤细胞的培养基里面筛选出了一 个差异蛋白分子量为 4160Da，鉴定为WW domain-containing oxidoreductase 或者 Peptide YY 。 结论：1 裸鼠皮下接种 HCT-116 细胞能成功构建移植瘤动物模型，此 模型易于操作，成功率高，模型稳定，可为研究大肠癌提供帮助。2 SELDI-TOF-MS 技术结肠癌裸鼠移植瘤模型差异蛋白的检测是有效的，能 发现早期大肠癌的标志蛋白。3 癌细胞体外培养发