SDF-1和其受体CXCR4在哮喘大鼠肺组织中的表达和AMD3100的干预作用.pdfVIP

摘要 SDF-1及其受体CXCR4在哮喘大鼠肺组织 中的表达及AMD31 00的干预作用 硕士研究生：王利霞 导 师：邹丽萍 专 业：儿科学 郑州大学第三临床学院 河南 郑州450052 摘 要 支气管哮喘是由多种细胞及细胞组份参与形成的慢性气道炎症。其病因和 发病机制尚未完全清楚，共同病理特征为气道炎症、气道高反应性及气道重塑。 糖皮质激素的长期应用，极大地缓解了哮喘病人的临床症状，生存质量得到了 明显提高，成为哮喘治疗的经典用药。但由于长期应用糖皮质激素，会伴随一 系列的副作用和依赖性，促使人们寻找另外方法治疗哮喘。随着分子生物学研 究的进步，逐渐认识到趋化因子及其受体在炎症性疾病中发挥着重要作用。研 cellderived factor-1， 究发现，CXC型趋化因子，基质细胞衍生因子．1(stromal chemokine 4，CXCR4)所形成的生物轴， SDF—1)和其特异性受体(CXCreceptor 在T淋巴细胞的活化与迁移、HIV致病机制、血管新生与重建、肿瘤转移、脑 部发育、血细胞形成等多方面中均扮演重要角色。最近的研究显示， SDF．1／CXCR4在哮喘发病中起到了重要作用，同时在小鼠哮喘模型中发现，雾 化吸入糖皮质激素布地奈德后，SDF．1／CXCR4在肺组织表达量降低。本实验参 照既往的方法加以改进，建立了大鼠哮喘模型。通过雾化吸入SDF．1／CXCR4 程中作用机制，为哮喘治疗寻求新的思路。 目 的 本实验通过建立大鼠哮喘模型，探讨SDF．1／CXCR4在哮喘大鼠肺组织中的 摘要 表达，及其特异性受体拮抗剂AMD3100干预的作用机制。 材料和方法 l动物分组及模型制作方法 雌性SD大鼠，健康清洁级，1月龄，体重100-。1209，30只。随机分组为 对照组、哮喘组和干预组，每组lO只。哮喘组大鼠分别于第1、8、15天腹腔 lIll致敏，从第16天 内注射10％卵白蛋白(ovalbumin，OVA)与氢氧化铝混悬液l 始激发，应用1％卵白蛋白与氢氧化铝混悬液压力雾化吸入，每次30分钟，隔 日激发1次，共激发20次；干预组以相同方法致敏和激发，在激发第11次时 开始于激发前30分钟，分别给予雾化吸入AMD310050坩只大鼠的量，隔日1 次，共lO次；对照组腹腔注射及雾化均给予等量的生理盐水代替，方法同哮喘 组。 2标本处理 三组大鼠分别在末次激发后24小时内，用苯巴比妥钠腹腔注射100mg／R， 麻醉后迅速给予开胸，取出右侧肺组织，快速放置于液氮中冻存，留作RT-PCR 及酶联免疫吸附试验用。取出左肺组织，置于4％甲醛溶液中，固定24小时后， 酒精梯度脱水，并石蜡包埋，选取平行及垂直气道两方向切片，厚度约为51an， 行苏木素．伊红(HE)染色。 3气道壁厚度测量： HE染色切片上，选取完整气道横断面。每张切片找出2个直径约为2mm 完整的同级别支气管，应用计算机图像分析系统，分别以总管壁面积与支气管 基底膜周径的比值，代表相应的管壁层厚度。 4酶联免疫吸附法(ELISA)： 应用大鼠IL．4、IL．5 ELISA试剂盒测定肺组织匀浆中IL．4、I