SCF及G-CSF对骨髓间充质干细胞在心肌梗死大鼠体内迁移影响的实验研究.pdfVIP

SCF和G—CSF对骨髓间充质干细胞在心肌梗死大鼠体内迁 移影响的实验研究 摘要 【目的】 通过尾静脉向心肌梗死大鼠移植骨髓间充质干细胞，探讨SCF和G．CSF对 MsCs归巢到心肌梗死区的作用，并验证在梗死心肌组织中定向分化为心肌细胞 的可能性及安全性，为干细胞移植技术用于心肌梗死的临床治疗提供动物实验依 据。 【方法】 无菌条件下取出大鼠双侧股骨，冲洗骨髓腔获得骨髓细胞，贴壁筛选法纯 化MSCs并进行体外培养扩增。结扎法建立大鼠心肌梗死模型，采用DAPI标记 细胞，于心肌梗死模型建立一周后尾静脉注入心肌梗塞模型鼠，根据分组情况， 于细胞移植前后三天皮下注射SCF和G．CSF．在移植MSCs四周后处死大鼠， 心脏冰冻切片观察心肌梗死区移植细胞的分布情况，采用计数方法比较注射不同 达。 【结果】 1．采用贴壁刷选法可获得较纯的Mscs，体外培养过程中细胞呈梭形贴壁生长， 扩增速度快，流式细胞仪检测细胞表面标记物，CD29和CD44阳性率分别为 数量足够，可满足细胞移植需要。 2．结扎左冠状动脉前降支可成功建立大鼠急性心肌梗死动物模型，结扎血管远 端供血区心肌组织颜色苍白，心电图动态检测到ST段持续性抬高及病理组 织切片作为模型制作成功的标志，该方法的结扎成功率为56％。 3．DAPI细胞标记率为lOO％，敏感性和特异性高。 4．MsCs植入四周后冰冻切片，荧光显微镜下观察，MSCs迁移至梗死心肌组织， 计学意义(P．O．01)。免疫荧光组织化学显示，植入的部分MSCs表达心肌特 异蛋白cTnJ。 【结论】 1．贴壁培养法可分离扩增得到高纯度，足够数量的MSCs，该方法简单易行。 2．左冠状动脉结扎可以建立大鼠心肌梗死模型。 联合应用可以促进MSCs归巢至心肌梗死区域，在体内微环境的诱导下， MSCs能够转化为心肌样细胞，免疫荧光组织化学检测心肌特异蛋白可以得 以证实。该课题的完成为MsCs的进一步应用打下实验基础。 【关键字】 间充质干细胞；心肌细胞；心肌梗死；细胞因子；诱导分化；归巢 2 onSCFandG-CSFafIfectthe of A皿expe池entaIstlIdy migration bonemarmw stemcellsin in mesenchymal infarction myocardial ratS Abstract 【Objective】 111eaimofmis wast0 mce骶ctofSCFaIldG-CSFonMSCs s砌y investigate con丘nIlmeMSCsdi伺衙eIltiatIedint0 in知℃ted homin吕and cardiomyocyt嚣in tis跚e me锄imal myocardium iIl访v0吐啪u曲tailvein仃allspl觚t，ltpr0Vide for ontlle clinical of 唧耐melltationst锄cells蛔nSpl锄ttecllnology tller叩y in觚t