sCD44分子对POAG小梁网细胞凋亡的影响和相关凋亡信号通路的研究.pdfVIP

sCD44分子对POAG小梁网细胞凋亡的影响及相关凋亡信号通路的研究 摘 要 目的 探讨不同浓度的可溶性CD44 分子（soluble CD44，sCD44）对原发性开角 型青光眼（primary open-angle glaucoma，POAG）小梁网细胞凋亡及其凋亡调节 蛋白Bcl-2 相关死亡因子Bad 蛋白表达的影响，研究 sCD44 与POAG 发病的关 系。 方法 采用组织块培养法原代培养POAG 小梁网细胞，运用透射电镜，免疫细胞 化学等方法对细胞进行鉴定，观察其生物学特性。取传3 代的小梁网细胞分别加 入含sCD44 终浓度为0ng/ml(对照组)，1 ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml,25 ng/ml,50 ng/ml 的无血清培养基，分别培养24 小时后收集细胞，采用CCK-8、荧光显微镜、流 式细胞仪和 ELISA，研究 sCD44 对 POAG 小梁网细胞凋亡及其凋亡调节蛋白 Bcl-2 相关死亡因子Bad 蛋白表达的影响。 结果 1.组织块经培养7 天左右，可见细胞从其边缘开始向外生长，倒置显微镜下 可见细胞形态多样，呈梭形、圆形、椭圆形等。电镜见细胞呈圆形或椭圆形，表 面较多微绒毛，细胞之间的连接主要为缝隙连接，胞质内多见次级溶酶体、粗面 内质网、线粒体；2. 免疫细胞化学法检测纤维粘连蛋白（fibronectin,FN）、层 粘连蛋白（laminin,LN）和神经元烯醇化酶（neuron specificenolase,NSE）染色阳 性，而阴性对照不着色；3.通过CCK-8 法检测发现：随着sCD44 终浓度的增加， sCD44 对 POAG 小梁网细胞的抑制作用增强，且各实验组之间以及实验组与对 照组相比差异有统计学意义(P0.05)；4.通过荧光显微镜观察显示随着sCD44 终 浓度的增加，早期和晚期凋亡细胞量明显增多；5.通过流式细胞仪法检测sCD44 终浓度为 1ng/ml,5 ng/ml,10ng/ml,25ng/ml,50 ng/ml 干预的实验组小梁网细胞凋亡 率分别为(10.7283±0.0223)，(17.3267±0.0250)，(21.1483±0.0248)，(25.1267± 0.0281)，（29.9900±0.0335)，均高于对照组小梁网细胞凋亡率（2.5550±0.0187）， 且各实验组之间以及实验组与对照组相比差异有统计学意义(P0.05)；6.ELISA 法检测sCD44 终浓度为 1 ng/ml,5 ng/ml,10 ng/ml,25ng/ml,50ng/ml 干预的实验组 小梁网细胞 Bad 蛋白浓度值分别为(89.9392±2.5995)pg/ml,(109.7353±3.9992) pg/ml,(120.1332±3.3993)pg/ml,(160.1252±5.3989)pg/ml,（220.5131±4.7990）pg/ml， 均高于对照组(71.1430±0.3999)pg/ml, 且各实验组之间以及实验组与对照组相比 3 差异有统计学意义(P0.05)。 结论 1. 采用组织块体外培养法能成功培养出原发性开角型青光眼小梁网细 胞；2. sCD44 可以抑制POAG 小梁网细胞的增殖，促进细胞凋亡,且在一定范围 内呈现一定的剂量依赖性；3. sCD44 可以促进细胞凋亡调节蛋白Bcl-2 相关死亡 因子Bad 蛋白的表达，对小梁网细胞凋亡可以通过内源性线粒体途径起作用。 关键词：sCD44 青光眼 小梁网 细胞培养技术 Bad 蛋白 4 Effect of soluble CD44 molecules on the apoptosis of Cultured trabecular meshwork cells from primary open angle glaucoma and the investigate of its apoptosis-signaling pathway Abstract Purpose To investi