SD大鼠主动脉瓣间质细胞自发钙化模型的建立及阿托伐他汀及氨氯地平的影响.pdfVIP

中文摘要 SD大鼠主动脉瓣间质细胞自发钙化模型的建立及阿托伐他汀和 氨氯地平的影响 摘 要 钙化性主动脉瓣疾病是一个慢性进展性疾病，包括早期的主动脉瓣硬 化(aortic aorticvalve 瓣膜病；且患者一旦出现临床症状，预后较差。随着研究的深入，对CAS 的认识逐渐从“与年龄相关的退行性过程”过渡到认为其是“主动调节的慢 性炎症过程”。临床来源的的主动脉瓣标本数量有限，且钙化较严重；用 猪、兔等建立的动物模型，耗时较长且较繁琐，故建立有效的体外疾病模 型显得尤为重要。 valveinterstitial 主动脉瓣间质细胞(aortic 生发展中起重要作用。目前用于CAS研究的AVICs多来源于猪，但由于 缺乏相应一抗，使研究受限。在有关CAS的体外研究中，多通过不同种 类或浓度的钙化诱导剂或刺激因子诱导AVICs钙化，这使得试验问结论 的可比性较差。SD大鼠是一种常用的实验动物，具有体积小、易饲养、 易购买等优点。目前以SD大鼠为研究对象对CAS进行的研究较少，可 能与大鼠主动脉瓣较小，不易分离培养有关。 本研究欲分离培养SD大鼠AVICs，并观察其在未给予钙化诱导剂或 刺激因子的情况下，随着培养时间的延长是否自发形成钙化灶；并检测钙 化过程中钙化相关因子的表达情况，同时观察阿托伐他汀及氨氯地平对自 发钙化的影响。 第一部分SD大鼠主动脉瓣间质细胞分离培养 目的：建立快速有效的SD大鼠AVICs体外培养方法。 方法：通过组织块法分离培养SD大鼠AVICs，观察细胞原代及传代 SEM和TEM对细胞表面和内部结构进行观察。 结果： l原代培养2～3天后，部分组织块周边有细胞爬出，呈梭形、三角形或不 中文摘要 规则形；原代培养7～8天后，细胞可达到70～80％融合，进行传代。 2 3经SEM检测可见，细胞贴壁良好，多边形，体积较大，细胞膜较薄且 充分伸展。 4经TEM检测可见，细胞体积较大，不规则形，可见绒毛；胞内细胞器 丰富，可见大量扩张的粗面内质网及与细胞长轴平行的肌丝；细胞核不规 则，可见核仁。 ． 结论： 1通过组织块法对SD大鼠AVICs进行培养，方法简单快速。 2经过形态学、细胞免疫学鉴定，SD大鼠AVICs为肌成纤维细胞。 第二部分 SD大鼠主动脉瓣间质细胞自发钙化模型的建立 目的：观察体外分离培养的SD大鼠AVICs是否可以自发形成钙化灶。 方法：通过组织块法分离培养SD大鼠AVICs，对不同培养时间的 AVICs进行VonKossa及茜素红染色、细胞内及其问质钙离子检测，评价 其是否可以自发形成钙化灶。 结果： 1培养至4-6天时，AVICs逐渐聚集成团，称为“细胞灶”，此时细胞灶较 小，散在分布；随着培养时间的延长，细胞灶体积逐渐增加，中心区亮度 增加。 2Von Kossa染色显示，6天时细胞灶染色阳性，即细胞灶处有钙盐沉积； 并且12天时阳性细胞灶个数及强度均大于6天组。 3茜素红染色显示，6天时细胞灶染色阳性，即细胞灶处有钙盐沉积；并 且12天时阳性细胞灶个数及强度均大于6天组。经统计分析显示，茜素 含量较低，12天组茜素红含量较高，即随着培养时间的增加钙盐沉积增 加。 4细胞及间质钙含量经统计分析显示，钙离子含量组间有统计学差异 (仁1 含量较高，即随着培养时间的增加钙盐沉积增加。 结论：通过延长细胞培养时间能够诱导其自发形成钙化灶。 第三部分SD大鼠主动脉瓣间质细胞自发钙化模型的机制研究 。 中文摘要 目的：检测AVICs在自发钙化过程中某些成骨相关基因的表达情况。 表达情况。 结果： l ALP活性检测结果表明，0天、6天、12天组ALP活性有统计学差异 始逐渐升高，至第6天达峰，之后逐渐下降。 2Cbfa1 mRNA、Osteo