SCF对高糖环境下膀胱cajal样间质细胞c-kitmRNA和蛋白表达影响.pdfVIP

摘 要 目的：通过逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR ）及激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)技术，检 测 SCF 干预对高糖环境下体外培养的豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞 c-kit mRNA 及蛋白的表 达，探讨 SCF 干预对高糖环境中已发生形态、机能变化的豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞表型、 功能逆转的可能性和可行性。 方法：本实验通过胶原酶酶解法分离、提取、纯化豚鼠膀胱 Cajal 样间质细胞并培养 24 小 时后，分别加入不同葡萄糖浓度（15mmol/L、30mmol/L ）培养基继续培养72 小时后（c-kit 明显降低时期），然后分别加入不同 SCF 浓度（50 ng/ml、100 ng/ml）培养基培养24 小时或 72 小时。应用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR ）检测膀胱Cajal 样间质细胞 c-kit mRNA 含 量；应用激光扫描共聚焦显微镜（LSCM ）检测膀胱Cajal 样间质细胞 c-kit 蛋白表达。 结果：豚鼠膀胱 Cajal 样间质细 c-kit mRNA 含量和蛋白表达各单纯高糖对照组均比正常对 照组明显下降（P 0.01 ）；24 小时组，SCF50ng/ml 干预组 c-kit mRNA 含量和蛋白表达较高 糖 15mmol/L 对照组无差异（P 0.05 ），SCF100ng/ml 干预组 c-kit mRNA 含量和蛋白表达较 15mmol/L 高糖对照组升高（P 0.05 ），SCF50ng/ml、SCF100ng/ml 干预组 c-kit mRNA 含量 和蛋白表达较 30mmol/L 高糖对照组均无差异；72 小时组，SCF50 ng/ml、SCF100ng/ml 干 预组 c-kit mRNA 含量和蛋白表达均较 15mmol/L 高糖对照组明显升高（P 0.01 ），SCF50 ng/ml 、SCF100 ng/ml 干预组 c-kit mRNA 含量和蛋白表达较 30mmol/L 高糖对照组升高（P 0.01 ）。 结论：微环境高糖环境可导致体外培养的豚鼠膀胱Cajal样间质细胞c-kit表达下降，从而使 SCF/c-kit信号通路受阻，在微环境中加入高浓度SCF刺激后，可促进高糖环境中已发生形态、 机能变化的豚鼠膀胱Cajal样间质细胞c-kit重新表达，从而促进SCF/c-kit信号通路恢复，以维 持豚鼠膀胱Cajal样间质细胞表型和功能。从分子生物学水平证明微环境中高浓度SCF干预对 高糖环境中已发生形态、机能变化的豚鼠膀胱Cajal样间质细胞c-kit表达有促进作用，并与微 环境中SCF的干预时间和浓度可能有密切的联系。 关键词：膀胱 Cajal 样间质细胞；c-kit ；SCF/c-kit 信号通路；高糖环境 论文类型：A （应用研究） - I - Abstract Purpose: To examine SCF intervention to the interstitial cells of Cajal-like(ICCs) of c-kit mRNA and protein in the bladder of guinea pig in high glucose through reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR) and laser scanning confocal microscopy(LSCM), and discover the possibility and feasibility which SCF intervention to the shape and function changed ICCs in the high sugar environment. Methods: The ICCs-like cells were isolated from the bladder of guinea pig by collagenase separation, extraction, purification and c