STIM1STIM2对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型和免疫功能的影响.pdfVIP

目 录 1 STIM1/STIM2 对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型及 免疫功能的影响……………………………………………… 1 1.1 中文摘要………………………………………………………1 1.2 英文摘要………………………………………………………6 1.3 前言……………………………………………………………9 1.4 实验流程简图…………………………………………………15 1.5 材料与方法……………………………………………………16 1.6 结果……………………………………………………………27 1.7 讨论……………………………………………………………35 1.8 结论……………………………………………………………40 1.9 参考文献………………………………………………………41 2 英汉缩略词对照表……………………………………………44 3 致谢……………………………………………………………46 4 泛素蛋白酶体系统与自身免疫性疾病 （综述）……………47 5 系统性红斑狼疮合并纵向脊髓炎一例………………………59 2 STIM1/STIM2 对人外周血单核细胞来源的树突状细胞表型 及免疫功能的影响 摘 要 目的：深入探讨 STIM1/STIM2 对人外周血单核细胞来源的树突状细胞 （DCs ）表型及免疫功能的影响，包括形态学、细胞表型、吞噬功能及刺 激淋巴细胞增殖的能力，以期揭示STIM1/STIM2 在自身免疫性疾病（AID ） 发病机制中的重要作用。方法：取正常人外周血密度梯度离心法及连续贴 壁法分离单核细胞，细胞因子重组粒细胞- 巨噬细胞集落刺激因子 （GM-CSF ）、白细胞介素-4 （IL-4 ）、肿瘤坏死因子-α （TNF-α ）诱导分化 获得DCs 。采用核醣核酸干扰 （RNAi ）技术，脂质体法将STIM1 siRNA 与STIM2 siRNA 分别转入DCs 并设立对照，即对照组、DCs-iSTIM1 组、 DCs-iSTIM2 组。（1）倒置相差显微镜、透射电镜（TEM ）及扫描电镜（SEM） 下观察比较各组DCs 在形状、大小、突起、细胞超微结构等方面的形态学 差异；（2 ）采用直接免疫荧光标记法及流式细胞仪 （FCM ）技术鉴定各组 DCs 表型HLA-DR 、CD1a、CD83、CD80、CD86、CD40 表达阳性的细胞 百分比和平均荧光强度值，以分别比较DCs-iSTIM1 组、DCs-iSTIM2 组与 对照组之间HLA-DR 、CD1a、CD83、CD80、CD86、CD40 表达量及平均 荧光强度的差异；（3 ）将DCs 与FITC-葡聚糖微球（dextran ）相互作用， 采用FCM 检测PE-CD11c 和FITC-dextran 双阳性细胞占CD11c 阳性细胞 百分比，对比各组DCs 对dextran 的吞噬能力，以评价干扰STIM1 或STIM2 对DCs 吞噬能力的影响；（4 ）诱导DCs 同种异体混合淋巴细胞反应（MLR ）， 3 四甲基偶氮唑盐（MTT ）细胞增殖检测实验测定各组淋巴细胞增殖情况， 比较各组之间OD 值的差异以评价干扰STIM1 或STIM2 对DCs 刺激淋巴 细胞增殖能力的影响。结果：（1）TEM 观察下，与对照组相比，DCs-iSTIM1 组和DCs-iSTIM2 组DCs 的细胞突触更细、多、长，部分可见突起相互交 叉成网格状；肿胀线粒体数目增多，肿胀程度增加，甚至出现小空泡状结 构；但是，在倒置相差显微镜和SEM 观察下，三组之间的DCs 形态学表 现无明显差异；（2 ）FCM 检测细胞表型HLA-DR 、CD1a、CD83、CD80、 CD86 、CD40 阳性细胞的百分比及平均荧光强度值。DCs-iSTIM1 组与 DCs-iSTIM2 组共刺激分子 CD83、CD80、CD86、CD40