针对抗ProGRP单克隆抗体的小细胞肺癌预定位显像实验的分析研究.pdfVIP

基于抗 ProGRP 单克隆抗体的小细胞肺癌预定位显像实验研究 中文摘要 基于抗ProGRP 单克隆抗体的小细胞肺癌 预定位显像实验研究 中文摘要 目 的： 99 m 分别通过直接法和预定位方法利用 TC 标记抗胃泌素释放肽前体（ProGRP ）单 克隆抗体 D-D3 ，并对比研究这两种不同方法的标记产物在正常裸鼠和人小细胞肺癌 荷瘤裸鼠体内的分布情况及显像效果，进一步探讨通过预定位技术标记的抗胃泌素释 放肽前体单克隆抗体显像是否可以作为早期诊断小细胞肺癌的最佳途径。 方 法： 1. 生物素化单抗 D-D3 的制备及检测 将抗胃泌素释放肽前体单克隆抗体 D-D3 溶于碳酸氢钠溶液、生物素活化酯溶于 无水二甲基亚砜（DMSO ）中，按生物素活化酯与抗体的质量比为8:1 在室温下放置 3~4 h，用 SephadexG50 层析柱进行纯化。分别采用 HABA/Avidin 试剂盒、细胞 ELISA 法对抗体的生物素化程度及其活性进行测定；ELISA 法检测生物素化抗体的效价；并 以生物素化单克隆抗体D-D3 为一抗，用免疫组化法检测靶组织的 ProGRP 蛋白表达。 2. DTPA-生物素及单抗 D-D 99 m 3 的 Tc 标记及检测 2.1 放射性核素 99Tcm 标记生物素：将 DTPA-生物素用 0.05 mol/L 的PBS 溶解， 加入浓盐酸配制的氯化亚锡溶液中，再加入一定量的 99TcmO4- ，室温下振摇均匀。标 记时分别改变不同标记体积和加入不同量的亚锡以摸索最佳标记条件，纸层析法测不 同标记条件下的标记率；将标记产物分别与生理盐水及正常人血清混合后置于37℃ 水浴箱，分别在不同时间点测定放化纯以了解其稳定性。 2.2 99 m 99 m Tc 直接法标记 D-D ：采用 2-巯基乙醇还原法制备标记 Tc -D-D ，凝胶 3 3 柱分离法纯化标记产物，纸层析法检测标记率、放化纯并了解其稳定性，利用细胞结 合分析法测定 99Tcm-D-D3 的免疫活性。 I 中文摘要 基于抗 ProGRP 单克隆抗体的小细胞肺癌预定位显像实验研究 3. 标记抗体在正常裸鼠和荷瘤裸鼠体内的分布研究 正常裸鼠采用三步法预定位技术给药，首先自尾静脉注射生物素化抗体 200 μg ； 1 天后注射 200 μg 亲和素；第 3 天注入 99Tcm-DTPA-生物素 0.148 MBq （0.004mCi ）， 于不同时间点采取颈椎脱臼法处死裸鼠，取其血液及各主要脏器组织标本，计算不同 时间点的每克组织注射百分剂量比（%ID/g ）。 建立小细胞肺癌荷瘤裸鼠模型，分为预定位组和直接法标记组。预定位组包括 A 组：首先自尾静脉注射生物素化抗体 200 μg ；1 天后注射 200 μg 亲和素；第 3 天注入 99Tcm-DTPA-生物素 0.148 MBq （0.004mCi ）。B 组：第 1 天注射不含抗体的生物素， 其余同 A 组。C 组：第 1、2 天均注射生理盐水，其余同 A 组。直接法标记组即 D 组： 直接注射 99Tcm-D-D 0.148 MBq （0.004mCi ）。各组裸鼠于不同时间点采取颈椎脱臼法 3 处死裸鼠，取其血液及各主要脏器组织标本，计算不同时间点的%ID/g 和瘤体/非瘤 体组织放射性计数（T/NT ）比值。 4. 正常裸鼠和小细胞肺癌荷瘤裸鼠体外预定位显像研究