CathepsinB基因的沉默对香蕉穿孔线虫繁殖力的影响-生物在线.PDFVIP

中国农业科学 2010,43(8):1608-1616 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2010.08.009 Cathepsin B基因的沉默对香蕉穿孔线虫繁殖力的影响 1 1 1 2 1 李 宇 ，谢 辉 ，徐春玲 ，李丹蕾 , 张 超 1 2 （华南农业大学资源环境学院植物线虫研究室/华南农业大学植物检疫线虫检测与防疫研究中心，广州 510642 ； 东北林业大学林学院， 哈尔滨 150040 ） 摘要： 【目的】通过研究cathepsin B 基因对香蕉穿孔线虫（Radopholus similis ）繁殖力的影响，探索 cathepsin B 基因的功能，为利用该基因防治香蕉穿孔线虫和植物寄生线虫组织蛋白酶的进一步研究提供科学依 据。【方法】根据已知香蕉穿孔线虫cathepsin B基因（Rs-cb-1 ）的序列，从香蕉穿孔线虫克隆cathepsin B 基 因，以含有目的基因的质粒 DNA 为模板合成特异的双链 RNA（dsRNA），采用 dsRNA 浸泡的方法对香蕉穿孔线虫进 行RNA干扰（RNAi）试验,通过室内接种胡萝卜愈伤组织繁殖线虫的方法，研究cathepsin B基因的沉默效应对香 蕉穿孔线虫繁殖力的影响。【结果】用 Rs-cb-1 dsRNA浸泡12、24、48、72 h后香蕉穿孔线虫的平均繁殖倍数分 别为165、93、54、53，而未经dsRNA处理的该线虫繁殖倍数均大于420；并且 Rs-cb-1 dsRNA浸泡的时间不同， 对应各处理之间的繁殖倍数差异显著。RT-PCR检测,经 Rs-cb-1 dsRNA浸泡12 h后，目的基因在香蕉穿孔线虫的 表达量明显减弱，浸泡 24 h 后其表达量进一步减弱，但还有微量表达，经 dsRNA 浸泡 48、72 h 后目的基因基本 不表达。【结论】Rs-cb-1 与香蕉穿孔线虫的繁殖力相关；Rs-cb-1 dsRNA的浸泡可以明显抑制cathepsin B基因 的表达量，从而影响香蕉穿孔线虫的繁殖力，但浸泡时间不同 Rs-cb-1 的沉默效率也不同，沉默效率最好的干涉 时间是48 h。 关键词：香蕉穿孔线虫；cathepsin B基因；RNA干扰；繁殖力 RNAi Effect of Cathepsin B Gene on Reproduction of Radopholus similis 1 1 1 2 1 LI Yu , XIE Hui , XU Chun-ling , LI Dan-lei , ZHANG Chao 1 ( Research Center of Nematodes of Plant Quarantine, Laboratory of Plant Nematology/College of Natural Resources and Environment, South China Agricultural University, Guangzhou 510642; 2College of Forestry, Northeast Forestry University, Haerbin 150040)