HRP伏安酶联免疫分析新体系测定人血清铁蛋白-上海有机化学研究所.PDF

化学学报 ACfA CHlMICA SINICA 1朔，57 ， 914 - 921 OAP - H 0 2 - HRP 伏安酶联免疫分析 2 新体系测定人血清铁蛋白 焦奎b 陈洪渊a 张书圣a (a 南京大学化学系南京 21α)93) E····EE--z· (b 青岛化工学院应用化学系 青岛发剧42) 摘要 首次提出邻氨基盼(OAP)-H 乌辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系并用于 2 鸟氧化 人血清中铁蛋白的测定.本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测 HRP 催化 H OAP 的产物， 2 用于游离 HRP 和各种 HRP标记物的测定，灵敏度均高于经典的 EUSA 显色光度法.测定游离 HRP 的线性范围为 1 .0 x 10- 12 - 4.0 x 10 - 9 吕/mL，检测限达 6.0x 1O- 13 g1mL.本法对铁蛋白测定的线性 范围为 0.2 - 320nglmL.用所建立的方法对人血清样品进行了测定，并与现行的 EUSA 显色光度法 进行对照，二者相关性很好.对此伏安酶联免疫分析新体系的电极还原过程也进行了详细的研究. 关键词 邻氨基盼，辣根过氧化物酶，免疫分析，伏安法，铁蛋白 人血清铁蛋白(ferritin) 为一贮存及利用铁的蛋白质，分子量为 44α则，主要贮存于网状内 皮系统及骨髓中.人铁蛋白微量存在于血清中，但血清铁蛋白放度的水平及其变化可以反映体 内的铁贮备，因而较广泛地用于临床某些血液疾病的诊断及鉴别诊断.铁蛋白是缺铁性贫血及 肝癌的一项重要指标.目前临床检测中测定铁蛋白的常用方法有间接血凝试验、琼脂双扩散及 EUSA 等方法[1 - 3J 这三种方法中，EUSA 的特异性和敏感性较好，是目前较为流行的检测方 法，但由于该方法采用传统的显色光度作为检测方法，影响了该方法灵敏度的进一步提高，而 且易受到生物样品中常遇到的浑浊、黄瘟、溶血和脂尿的干扰. 以生物酶作为标记物的伏安酶联免疫分析法是将酶催化反应、免疫技术和伏安法检测相 结合的一种免疫分析方法，具有广阔的应用前景[4 斗J 本文提出了以邻氨基酣(OAP) 为底物的 OAP- H 0 - 辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系，以极谱法和伏安法检测 HRP 2 2 催化 H 0 OAP 的产物，用于游离 HRP 和各种 HRP 标记物的测定，灵敏度均高于经典的 氧化 2 2 E口SA 显色光度法.本体系以邻氨基酣为底物，在 EUSA 显色光度法中也未见有过报道.此方 法成功地应用于人血清中铁蛋白的测定，检测下限比邻苯二肢显色光度法低5 倍，且具有更宽 的线性测定范围，样品基体对测定不产生干扰.本文对酶促反应产物的电极还原过程也进行了 详细的探讨. 1 实验部分 末男，53 岁，博土，教授，博士生导师 收稿日期:1998-10-19 ，定稿日期:1998-12-14 ，国家自然科学基金资助项目 化学学报 A口A CHIMICA SINICA 1朔 915 1. 1 仪器与试剂 MP-l 型溶出分析仪，山东电讯七厂，三电极系统，滴录电极为工作也极，铅电极为