地西他滨联合丙戊酸钠对淋巴瘤细胞株Jurkat增殖凋亡影响的实验探究.pdfVIP

中文摘要 地西他滨联合丙戊酸钠对淋巴瘤细胞株Jurkat 增殖凋亡影响的实验研究 摘 要 目的：T细胞淋巴瘤(T．cell lymphoma)是一种来源于T淋巴细胞的 恶性克隆增殖性疾病。目前对其治疗主要是常规化疗，效果差且易复发， 需寻找有效药物及其联合治疗方案以提高T细胞淋巴瘤患者的疗效改善 预后。表观遗传学对肿瘤的治疗作用越来越受到关注，其中主要包括去甲 基化治疗和组蛋白乙酰化治疗。 国内外研究已证实淋巴瘤患者及其细胞系中存在异常的高度甲基化， 5INK4B基因，SHP．1基 经常发生于富于CpG岛的肿瘤抑制基因(如P1 因，P53基因)启动子区，并导致该基因的沉默。同时也发现存在组蛋白 结合，抑制其活性，造成DNA低甲基化，激活抑癌基因引起细胞分化或 凋亡。FDA已经正式批准地西他滨用于治疗骨髓增生异常综合征(MDS)。 化和表达增强，从而抑制肿瘤细胞增殖。丙戊酸钠(sodiumvedproate，vPa) 从1970年用于治疗癫痫。最近的研究显示，VPA可以抑制组蛋白去乙酰 化酶，调节细胞周期，诱导肿瘤细胞凋亡，和抑制血管生成，对淋巴瘤亦 有抗肿瘤作用。故DAC与VPA两者有联合用药的可能。 为进一步明确地西他滨对淋巴瘤细胞增殖及促凋亡的机制，本实验选 制以及诱导凋亡作用，及VPA与DAC联合对上述作用的影响。并检测 甲基化酶洲T3AmRNA表达的变化，为T细胞淋巴瘤新的治疗方法提 供理论依据。 方法： l常规方法培养人T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株，每24小时传代一次。选 用对数期细胞进行试验。 2MTT法检测不同浓度的地西他滨、丙戊酸钠单药及二者联合应用对 中文摘要 的抑制率，联合用药组观察48hJurkat细胞的抑制率，并用金正均公式计 算联合用药是协同作用还是拮抗作用，计算公式为：Q=EAB／ (EA+EB—EAEB0 EA和EB为各药单用抑制率，EAB为两药合用抑制 3AnnexinV／PI双染法检测不同浓度的地西他滨、丙戊酸钠单药及二者联 合使用对Jurkat淋巴瘤细胞凋亡的影响，药物作用浓度同MTT实验，观察 单药作用24h、48h、72h的凋亡率和联合用药24h的凋亡率； 4半定量RT-PCR法检测地西他滨、丙戊酸钠单药及二者联合用药各组 mRNA表达的变化：药物作用浓度同MTr实验，观察 Jurkat细胞DNMTs mRNA表达量变化，联合用药作用 单药作用24h、48h、72h的DNMTs 48h的表达量变化； 5统计学分析：SPSSl3．0软件进行分析，分组资料的表示用均数4-标准差， 两组比较应用t检验，多组比较应用单因素方差分析，P0．05为有差异， 提示有统计学意义。 结果： 不同浓度的DAC作用于Jurkat l地西他滨对Jurkat细胞增殖抑制的影响 h、48h、72 细胞24 h后，发现随着药物作用浓度的增加和作用时间的延 长，增殖抑制率由14．67％增力nN80．6％，各处理组之间，以及处理组和对 增殖，并呈时间、剂量依赖性。 不同浓度的丙戊酸钠作用于 2丙戊酸钠对Jurkat细胞增殖抑制的影响 h、48h、72 Jurkat细胞24 h后，发现随着药物作用浓度的增加和作用时间 的延长，增殖抑制率由14．47％增加到77．51％，各处理组之间，以及处理 细胞增殖也呈时间、剂量依赖性。 3地西他滨对Jurkat细胞凋亡的影响流式细胞术分析结果显示，DAC 作用于Jurkat细胞，随时间延长和药物浓度的增加，细胞凋亡率由18．9％ 增力nN47．2％。统计学分析显示各处理组之间，处理组和对照组间均有统 中文摘要 计学