宫颈癌紫杉醇联合顺铂新辅助化疗前后蛋白质组学探究.pdfVIP

天津医科人学博十论文 中文摘要 目的： 采用双向凝胶电泳(two．dimensional 感的宫颈癌组织化疗自订后蛋白质组的差异，建立TP化疗前后的宫颈癌2一DE 图谱，识别和鉴定差异表达的蛋白质，初步确定宫颈癌中与TP作用相关的蛋白 质，研究其作用机制，为改善宫颈癌患者TP新辅助化疗疗效、研制新的肿瘤靶 向药物提供实验及理论依据。 方法： 1、选取6例宫颈痛住院病人，纳入标准为：①化疗盼为局部晚期菜花型； ②采用紫杉醇加顺铂新辅助化疗：均化疗1次，紫杉醇175mg／m2，顺铂60mg／m2； ③化疗10天后评价疗效为显效，肿瘤体积缩小50％以上；④约化疗后15天行 广泛性子宫切除术及盆腔淋巴结清扫术；⑤术后病理诊断均为中分化鳞癌。宫 颈癌组织化疗前后标本收集后立即一80℃保存。提取组织总蛋白，采用2-DE分 离蛋白质，经考马斯亮蓝染色、图像扫描，得到化疗前后的双向电泳图谱，采 用PD．quest7．0软件进行匹配和差异分析，识别两组之间表达差异蛋白点。从胶 析，获取质谱图，数据库搜索鉴定蛋白质。 2、根据获得的差异蛋白的分类及抗体购买的难易程度选择4个差异表达蛋 白，应用WesternBlot方法进行验证，检测其在以上6例宫颈癌组织标本中化疗 前后的表达变化，观察它们在化疗前后的表达是否与蛋白质组学方法检测结果 一致。以蛋白质组学所用提取的组织蛋白为研究对象，制备PAGE胶，测蛋白 浓度后等量上样，SDS．PAGE电泳，PVDF转膜，脱脂奶粉封闭，抗体孵育， HRP．ECL发光法显色，胶片定影、扫描、分析。以GAPDH为内参。 结果： 1、建立了分辨率高、重复性好的宫颈癌化疗前后的双向凝胶电泳图谱。化 疗前蛋白点598士64个，化疗后蛋白点673士79个，组间平均匹配率为85．4％。 2、两组间差异表达蛋白质点数为102个，从中选择表达差异明显的13个 点进行质谱分析，全部鉴定成功，其中化疗后与化疗前相比，11个蛋白下调，2 天津医科人学博十论文 个蛋白上调。化疗后表达下调的蛋白：辅肌动蛋白Q1(actininalpha1)、核 translation B1)、真核翻译延长因子ly(Eukaryotic 纤层蛋白B1(1amin factor1 ganuna)、烯醇化酶l(enolase1)、膜联蛋白1(annexin elongation ial l marker n thel cel 1)、醛缩酶A I)、上皮细胞标记蛋白1(epi protei shock (aldolaseA)、热休克蛋白27(heatprotein27)、丙酮酸激酶 II)、热休克蛋白70 kinase)、角蛋白II型(cytokeratintype (pyruvate (heatshock 70)；化疗后表达上调的蛋白：载脂蛋白A1 protein A—1)、膜联蛋白V(annexinV)。差异蛋白可归纳为3类： (apolipoprotein ①细胞骨架蛋白：辅肌动蛋白CI1，核纤层蛋白B1，角蛋白II型，膜联蛋白I， 膜联蛋白V；②糖酵解酶类：烯醇化酶l，醛缩酶A，丙酮酸激酶；③其它：真 核翻译延长因子1y，上皮细胞标记蛋白1，热休克蛋白27，热休克蛋白70， 载脂蛋白A1。 blot技术进行 3、选择HSP70、HSP27、烯醇化酶1、醛缩酶A用Western 验证，结果显示这四种蛋白在化疗前组中的表达高于化疗后组。该结果与蛋白 质组学研究