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白藜芦醇体外抑制肠道病毒71 型的作用机制研究 中文摘要 白藜芦醇体外抑制肠道病毒71 型的作用机制研究 中文摘要 目的：体外筛选抑制肠道病毒71 型（EV71 ）的有效中药单体，探讨白藜芦醇抗 EV71 的效应与分子作用机制。 方法：（1）噻唑蓝（MTT ）比色法检测几种常见解热抗炎中药单体和对照药物利 巴韦林对横纹肌肉瘤（RD ）细胞的毒性，以及对EV71 的病毒抑制率；（2 ）EV71 感 染RD 细胞后，Reed-Muench 法检测不同时间点EV71 组、DMSO 组、EV71+ 白藜芦 醇组和EV71+利巴韦林组的RD 细胞培养上清液的病毒滴度（TCID50 ）；（3 ）Western blot 方法检测不同时间点 EV71 感染组和 EV71+ 白藜芦醇处理组的IKKα、IKKβ 、 IKKγ 、IκBα、NF-κBp50 和NF-κBp65 总蛋白及其磷酸化水平，以及EV71 衣壳蛋白 VP1 的表达水平；（4 ）Luminex 液相芯片技术检测EV71 感染组与白藜芦醇干预组中 RD 细胞分泌TNF-α、IL-2 、IL-6、IFN-α 、IFN-β 细胞因子水平。 结果：（1）连翘苷、人参皂苷rh1 、黄芩素、虎杖苷、白藜芦醇和利巴韦林对RD 细胞的半数毒性浓度（CC50 ）分别为849.57μg/ml 、2766.54μg/ml 、140.13μg/ml、532.60 μg/ml、82.0μg/ml 和3577.03μg/ml ；（2 ）利巴韦林（125μg/ml）体外对EV71 的抑制 率达78.27%；连翘苷和人参皂苷rh1 都未表现出明显的抑制EV71 的作用；虎杖苷与 黄芩素对 EV71 的抑制作用较弱，接近无毒浓度的虎杖苷（200μg/ml ）和黄芩素 （31.25μg/ml ）对EV71 的抑制率分别为18.69±1.30%和31.91 ±1.27%；而白藜芦醇 具有较好的抗 EV71 效应，31.25μg/ml 时抑制率高达 73.28 ±6.33%，半数抑制浓度 （IC50 ）为20.70μg/ml （病毒吸附后加药），治疗指数（TI ）为3.96 ；（3 ）与EV71 感染组比较，8h、12h、24h 时白藜芦醇可明显抑制RD 细胞中EV71/VP1 合成（P ＜ 0.05 ）；白藜芦醇处理后可使RD 细胞培养上清液中EV71 滴度下降（P ＜0.05 ）；（4 ） EV71 感染可激活RD 细胞中NF-κB 信号通路，IKKα、IKKβ 、IKKγ 、IκBα、NF-κBp50 和NF-κBp65 磷酸化水平随感染时间延长逐渐增加，而白藜芦醇可显著抑制 IKKα、 IKKβ 、IKKγ 、IκBα 、NF-κBp50 和NF-κBp65 磷酸化水平（P ＜0.05 ）；（5 ）白藜芦醇 I 中文摘要 白藜芦醇体外抑制肠道病毒71 型的作用机制研究 可显著降低EV71 感染后RD 细胞分泌IL-6、TNF-α 和IFN-β （P ＜0.05 ），而对IL-2 和IFN-α 无作用（P ＞0.05 ）。 结论：白藜芦醇通过阻断RD 细胞的NF-κB 信号通路和炎性细胞因子的分泌从 而抑制EV71 复制。因而，白藜芦醇对EV71 感染具有较强的抗病毒作用。 关键词：肠道病毒71 型；白藜芦醇；衣壳蛋白VP1 ；NF-κB ；细胞因子 作 者：张 莉 指导老师：史伟峰 II 白藜芦醇体外抑制肠道病毒71 型的作用机制研究 英文摘要 The antiviral effectand mechanism of